本文選題：豬丹毒桿菌　切入點：溶血性曼氏桿菌　出處：《中國獸醫(yī)科學》2017年08期

【摘要】：為建立一種快速、準確檢測豬丹毒桿菌和溶血性曼氏桿菌二重TaqMan熒光定量PCR方法,本研究根據(jù)豬丹毒桿菌和溶血性曼氏桿菌16S rRNA基因保守序列設(shè)計種特異性引物及探針,并優(yōu)化反應(yīng)條件,建立了檢測豬丹毒桿菌和溶血性曼氏桿菌的二重TaqMan熒光定量PCR檢測方法。結(jié)果表明,所建方法特異性良好,與其他25種常見細菌均無交叉反應(yīng)。豬丹毒桿菌檢測在2.07×108~2.07×103copies/L范圍內(nèi)具有良好的線性關(guān)系,最低可以檢測到2.07×102copies/L的標準品陽性質(zhì)粒,批內(nèi)和批間變異系數(shù)均小于3%;溶血性曼氏桿菌檢測在1.07×108~1.07×103copies/L范圍內(nèi)具有良好的線性關(guān)系,最低可以檢測到1.07×102copies/L的標準品陽性質(zhì)粒,批內(nèi)和批間變異系數(shù)均小于3%。應(yīng)用建立的二重熒光定量方法和普通熒光定量方法對47份臨床樣品進行檢測,符合率為100%。本研究結(jié)果表明,所建立的方法可用于豬丹毒桿菌和溶血性曼氏桿菌感染的高通量快速診斷以及豬丹毒桿菌和溶血性曼氏桿菌的快速鑒定及定量分析。
[Abstract]:In order to establish a rapid and accurate method for the detection of dual TaqMan quantitative PCR of erysipelas porcine and M. haemolyticus, specific primers and probes were designed according to the conserved sequence of 16s rRNA gene of erysipelas and M.haemolyticus. A double TaqMan fluorescence quantitative PCR method for the detection of erysipelas and M.haemolyticus was established under optimized reaction conditions. The results showed that the method was of good specificity. There was no cross reaction with other 25 common bacteria. The detection of erysipelas had a good linear relationship in the range of 2.07 脳 10 ~ (8) ~ 2.07 脳 103copies/L, and a positive plasmid of 2.07 脳 102copies/L could be detected at least. The coefficient of variation within and between batches was less than 3, and the detection of M.haemolyticus had a good linear relationship in the range of 1.07 脳 10 ~ (8) ~ 1.07 脳 103copies/L, and the lowest positive plasmid of 1.07 脳 102copies/L could be detected in the range of 1.07 脳 10 ~ (8) ~ 1.07 脳 103copies/L. The coefficient of variation within and between batches was less than 3. The coincidence rate of 47 clinical samples was 100 by using the established double fluorescence quantitative method and the general fluorescence quantitative method. The established method can be used for high throughput rapid diagnosis of erysipelas and M.haemolyticus infection, and for rapid identification and quantitative analysis of erysipelas and M.haemolyticus.
【作者單位】： 云南省畜牧獸醫(yī)科學院;云南省陸良縣動物疾病預防控制中心;
【基金】：云南省現(xiàn)代農(nóng)業(yè)生豬產(chǎn)業(yè)技術(shù)體系建設(shè)項目(云財教[2013]160號) 云南省現(xiàn)代農(nóng)業(yè)奶牛產(chǎn)業(yè)技術(shù)體系建設(shè)(云財農(nóng)[2009]171號)
【分類號】：S852.61

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3 鄒W，

本文編號：1672079