本文選題：豬MNSFβ基因　切入點：豬BCL-G基因　出處：《西北農林科技大學》2015年碩士論文

【摘要】：單克隆非特異性免疫抑制因子-β(Monoclonal Nonspecific Suppressor Factorβ,MNSFβ)是一種在機體內廣泛分布的非抗原特異性免疫抑制因子,又是一種新的細胞凋亡調節(jié)因子和潛在的腫瘤抑制因子,可與不同的靶蛋白結合調控信號通路,在免疫調節(jié)和細胞凋亡過程中發(fā)揮重要作用。近年來在小鼠上被廣泛研究,但其功能在豬中鮮有報道,豬是一種比小鼠更理想的醫(yī)學實驗動物模型,對豬MNSFβ(p MNSFβ)基因的研究將為人類MNSFβ基因及相關疾病的研究提供重要的理論支持。本論文主要針對p MNSFβ基因的促凋亡功能展開研究,探究p MNSFβ是否與p BCL-G發(fā)生相互作用以及p MNSFβ與p BCL-G結合對細胞凋亡的影響。本研究獲得的研究結果如下:1.通過瞬時轉染和新霉素(G418)篩選穩(wěn)定表達GFP-p MNSFβ豬臍靜脈血管內皮細胞株(SUVEC),經倒置熒光顯微鏡觀察和western blot鑒定,穩(wěn)定表達GFP-p MNSFβ的SUVEC細胞株構建成功。2.免疫共沉淀實驗表明,pMNSFβ與pBCL-G蛋白能夠發(fā)生相互作用。3.通過形態(tài)學觀察和細胞核染色發(fā)現,隨著星孢菌素(STS)濃度的提高,皺縮、變圓、脫落、體積縮小,Hoechst 33342染色的細胞核內呈現亮藍色熒光等典型細胞凋亡特征越來越明顯,細胞凋亡的數量也相應增多。而且與對照組(GFP)相比,實驗組(GFP-pMNSFβ)的細胞凋亡特征更明顯。4.用Annexin V-PE與PI進行雙重染色結合流式細胞術分析表明,穩(wěn)定表達的pMNSFβ蛋白對STS誘導的細胞凋亡具有顯著的促進作用;p BCL-G與p MNSFβ蛋白共表達協同促進STS誘導的細胞凋亡。綜上所述,本論文首次通過實驗獲得穩(wěn)定表達GFP-p MNSFβ的SUVECs細胞株,證明了p MNSFβ能夠促進STS誘導的細胞凋亡,闡明了p MNSFβ與p BCL-G蛋白能夠發(fā)生相互作用,且p MNSFβ與p BCL-G蛋白對STS誘導的細胞凋亡有協同促進作用。
[Abstract]:Monoclonal Nonspecific Suppressor Factor 尾 (MNSF 尾) is a widely distributed non-antigen-specific immunosuppressive factor, and it is also a new apoptosis regulator and a potential tumor suppressor. It plays an important role in immunomodulation and apoptosis. It has been widely studied in mice in recent years, but its function is rarely reported in pigs. Pig is a more ideal animal model than mice. The study of porcine MNSF 尾 p MNSF 尾 gene will provide important theoretical support for the study of human MNSF 尾 gene and related diseases. This paper mainly focuses on the apoptotic function of p MNSF 尾 gene. To explore whether p MNSF 尾 interacts with p BCL-G and the effect of p MNSF 尾 binding with p BCL-G on apoptosis. The results of this study are as follows: 1. The stable expression of GFP-p MNSF 尾 in porcine umbilical vein blood was screened by transient transfection and neomycin G418). The tube endothelial cell line was identified by inverted fluorescence microscope and western blot. The stable expression of GFP-p MNSF 尾 in SUVEC cell line was successfully constructed. 2. The immunoprecipitation assay showed that pMNSF 尾 could interact with pBCL-G protein. By morphological observation and nuclear staining, it was found that with the increase of the concentration of GFP-p MNSF 尾, it shrinks, becomes round and falls off. The typical apoptotic characteristics such as bright blue fluorescence and the number of apoptotic cells in the nuclei stained by Hoechst 33342 were more and more obvious, and compared with those in the control group, the number of apoptotic cells in the cells with Hoechst 33342 was higher than that in the control group. The apoptotic characteristics of GFP-pMNSF 尾 in experimental group were more obvious. 4. Double staining with Annexin V-PE and Pi combined with flow cytometry showed that, The stable expression of pMNSF 尾 protein significantly promoted the apoptosis induced by STS. The coexpression of p BCL-G and p MNSF 尾 protein co-promoted the apoptosis induced by STS. In conclusion, SUVECs cell lines expressing GFP-p MNSF 尾 stably were obtained for the first time in this paper. It was proved that p MNSF 尾 could promote apoptosis induced by STS, and that p MNSF 尾 and p BCL-G protein could interact with each other, and p MNSF 尾 and p BCL-G protein had synergistic effect on STS induced apoptosis.
【學位授予單位】：西北農林科技大學
【學位級別】：碩士
【學位授予年份】：2015
【分類號】：S852.2

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