本文選題：豬流行性腹瀉病毒　切入點(diǎn)：S蛋白　出處：《中國(guó)動(dòng)物傳染病學(xué)報(bào)》2017年03期

【摘要】：本文以豬流行性腹瀉病毒(Porcine epidemic diarrhea virus,PEDV)流行毒株FJzz1/2011株的S1蛋白的切割位點(diǎn)設(shè)計(jì)合成特異性引物,通過(guò)RT-PCR擴(kuò)增獲得S1基因,將其克隆至轉(zhuǎn)移載體p Fast Bac HTA中,獲得了重組質(zhì)粒p Fast Bac HTA-S1,將該重組質(zhì)粒轉(zhuǎn)化E.coli DH10Bac感受態(tài)細(xì)胞,得到重組穿梭質(zhì)粒r Bacmid-S1,再將重組穿梭質(zhì)粒r Bacmid-S1轉(zhuǎn)染Sf9細(xì)胞,48 h后即可觀察到明顯的細(xì)胞病變。將收獲的r Bac-S1-P1代病毒在Sf9細(xì)胞上連續(xù)傳3代后,收獲細(xì)胞培養(yǎng)物,分別用間接免疫熒光鑒定(indirect immunofluorescence assay,IFA)、SDS-PAGE電泳和Western blot分析。結(jié)果顯示,P3代重組病毒r Bac-S1感染的細(xì)胞均呈現(xiàn)亮綠色熒光,證實(shí)表達(dá)產(chǎn)物可以被PEDV陽(yáng)性血清和抗S1蛋白的單抗特異性識(shí)別;SDS-PAGE電泳結(jié)果顯示在大約120 k Da左右可觀察到特異性條帶;Western blot結(jié)果證實(shí)該蛋白可以被抗S1蛋白的特異性單抗識(shí)別。綜上研究結(jié)果,證明利用桿狀病毒表達(dá)系統(tǒng)在Sf9細(xì)胞中成功表達(dá)了PEDV的S1蛋白,為進(jìn)一步研究PEDV S蛋白的抗原性奠定了基礎(chǔ)。
[Abstract]:In this paper, porcine epidemic diarrhea virus (Porcine epidemic diarrhea virus, PEDV) FJzz1/2011 strains strain S1 protein cleavage site of primers were designed by RT-PCR, S1 gene was amplified, cloned into transfer vector p Fast Bac HTA, P Fast Bac to get the recombinant plasmid HTA-S1, the recombinant plasmid was transformed into E.coli DH10Bac competent cells to obtain the recombinant shuttle plasmid R Bacmid-S1, then the recombinant plasmid R Bacmid-S1 was transfected into Sf9 cells after 48 h can be observed after r cell lesions. Bac-S1-P1 virus in Sf9 cells for 3 generations after the cell cultures were harvested respectively, using indirect immunofluorescence assay (indirect immunofluorescence assay, IFA), SDS-PAGE electrophoresis and Western blot analysis. The results showed that P3 generation of recombinant virus R Bac-S1 infected cells showed bright green fluorescence, confirmed the expression products Identify specific PEDV positive serum and the monoclonal antibody against S1 protein; SDS-PAGE electrophoresis results showed that about 120 K Da can be observed in specific bands; Western blot confirmed the specificity of monoclonal antibodies against the protein can be anti S1 protein. The results prove that, using baculovirus expression system in Sf9 cells the successful expression of PEDV S1 protein, which laid the foundation for the further study of PEDV antigenicity of S protein.

【作者單位】： 中國(guó)農(nóng)業(yè)科學(xué)院上海獸醫(yī)研究所;江蘇高校動(dòng)物重要疫病與人獸共患病防控協(xié)同創(chuàng)新中心;
【基金】：國(guó)家自然科學(xué)基金項(xiàng)目(31472207) 國(guó)家重點(diǎn)研發(fā)計(jì)劃項(xiàng)目(2016YFD0500100) 國(guó)家生豬現(xiàn)代產(chǎn)業(yè)技術(shù)體系建設(shè)項(xiàng)目(CARS-36)
【分類(lèi)號(hào)】：S852.651

【相似文獻(xiàn)】

相關(guān)期刊論文 前10條

1 余祖華;王紅寧;周生;黃勇;柳萍;;禽傳染性支氣管炎病毒S1基因在畢赤酵母中的表達(dá)[J];中國(guó)獸醫(yī)學(xué)報(bào);2007年06期

2 陳洪巖,江國(guó)托,楊奇?zhèn)?陳獎(jiǎng)勵(lì),張寶山,劉勝旺,盧景良;雞傳染性支氣管炎病毒S1基因免疫對(duì)雞的保護(hù)作用[J];中國(guó)預(yù)防獸醫(yī)學(xué)報(bào);1999年04期

3 游洪,王林川;雞傳染性支氣管炎病毒中國(guó)地方分離株S1基因的克隆及其鑒定[J];中國(guó)獸醫(yī)學(xué)報(bào);2002年03期

4 余祖華;王紅寧;周生;黃勇;丁軻;;禽傳染性支氣管炎病毒S1基因畢赤酵母表達(dá)載體的構(gòu)建[J];中國(guó)家禽;2006年21期

5 祁賢,葉向陽(yáng),張婉華,朱永軍,步志高,劉思國(guó);雞傳染性支氣管炎病毒地方分離株S1基因克隆和基因型鑒定[J];上海農(nóng)業(yè)學(xué)報(bào);2000年04期

6 宋延華,劉福安;雞傳染性支氣管炎病毒S1基因在昆蟲(chóng)細(xì)胞中的高效表達(dá)[J];中國(guó)獸醫(yī)學(xué)報(bào);1999年05期

7 畢研麗;苗立中;王金良;郭廣君;呂素芳;沈志強(qiáng);;雞傳染性支氣管炎病毒的分離鑒定及S1基因的分子特征[J];畜牧與獸醫(yī);2013年02期

8 謝紅梅;張興曉;朱來(lái)華;常維山;;雞傳染性支氣管炎病毒S1基因在大腸桿菌中的表達(dá)及其抗原性的初步鑒定[J];農(nóng)業(yè)生物技術(shù)學(xué)報(bào);2007年01期

9 磨美蘭;韋正吉;韋平;韋天超;李康然;;傳染性支氣管炎病毒的分離及其S1基因高變區(qū)Ⅰ的遺傳變異性分析[J];養(yǎng)禽與禽病防治;2007年02期

10 邱深本;王磊;蘇丹萍;黃愛(ài)芳;羅映霞;賀東生;;豬呼吸道冠狀病毒S1基因的克隆與序列分析[J];中國(guó)動(dòng)物檢疫;2009年06期

相關(guān)會(huì)議論文 前10條

1 余祖華;王紅寧;周生;黃勇;柳萍;唐夢(mèng)君;胡慧瓊;李曉英;廖娟;張毅;;禽傳染性支氣管炎病毒S1基因在畢赤酵母中表達(dá)的研究[A];第六屆全國(guó)會(huì)員代表大學(xué)暨第11次學(xué)術(shù)研討會(huì)論文集（下）[C];2005年

2 余祖華;王紅寧;丁軻;;禽傳染性支氣管炎病毒S1基因在畢赤酵母中表達(dá)的研究[A];第四屆第九次全國(guó)學(xué)術(shù)研討會(huì)暨飼料和動(dòng)物源食品安全戰(zhàn)略論壇論文集（下冊(cè)）[C];2008年

3 余祖華;王紅寧;周生;黃勇;柳萍;丁軻;;禽傳染性支氣管炎病毒S1基因在畢赤酵母中表達(dá)研究[A];中國(guó)畜牧獸醫(yī)學(xué)會(huì)禽病學(xué)分會(huì)第十四次學(xué)術(shù)研討會(huì)論文集[C];2008年

4 余祖華;王紅寧;周生;黃勇;柳萍;唐夢(mèng)君;胡慧瓊;李曉英;廖娟;張毅;;禽傳染性支氣管炎病毒S1基因在畢赤酵母中表達(dá)的研究[A];中國(guó)畜牧獸醫(yī)學(xué)會(huì)家畜傳染病學(xué)分會(huì)第六屆全國(guó)會(huì)員代表大會(huì)暨第11次學(xué)術(shù)研討會(huì)論文集[C];2005年

5 張志坤;王紅寧;周英順;姬高升;;禽傳染性支氣管炎病毒S1基因聚類(lèi)分析及快速檢測(cè)方法[A];中國(guó)畜牧獸醫(yī)學(xué)會(huì)家畜傳染病學(xué)分會(huì)第八屆全國(guó)會(huì)員代表大會(huì)暨第十五次學(xué)術(shù)研討會(huì)論文集[C];2013年

6 王紅寧;魏甬;周生;柳萍;;禽傳染性支氣管炎病毒中國(guó)四川株S1基因的克隆與序列分析[A];中國(guó)畜牧獸醫(yī)學(xué)會(huì)禽病學(xué)分會(huì)第十一次學(xué)術(shù)研討會(huì)論文集[C];2002年

7 楊鑫;王紅寧;張毅;曾誠(chéng);周英順;蔣魏;;西南地區(qū)禽傳染性支氣管炎病毒分離株S1基因系統(tǒng)進(jìn)化分析[A];中國(guó)畜牧獸醫(yī)學(xué)會(huì)禽病學(xué)分會(huì)第十六次學(xué)術(shù)研討會(huì)論文集[C];2012年

8 胡桂學(xué);陳中秋;董麗娜;高鳳山;;豬傳染性胃腸炎病毒S1基因重組乳酸菌的構(gòu)建與表達(dá)研究[A];中國(guó)畜牧獸醫(yī)學(xué)會(huì)家畜傳染病學(xué)分會(huì)第七屆全國(guó)會(huì)員代表大會(huì)暨第十三次學(xué)術(shù)研討會(huì)論文集（下冊(cè)）[C];2009年

9 田占成;孫永科;王云峰;智海東;劉勝旺;王玫;童光志;;表達(dá)傳染性支氣管炎病毒S1基因重組禽痘病毒的構(gòu)建[A];中國(guó)畜牧獸醫(yī)學(xué)會(huì)畜牧獸醫(yī)生物技術(shù)學(xué)分會(huì)暨中國(guó)免疫學(xué)會(huì)獸醫(yī)免疫分會(huì)第六次研討會(huì)論文集[C];2005年

10 任濤;廖明;羅開(kāi)健;曹偉勝;辛朝安;;雞傳染性支氣管炎病毒我國(guó)地方分離株S1基因5’端的變異研究[A];中國(guó)畜牧獸醫(yī)學(xué)會(huì)禽病學(xué)會(huì)分會(huì)第十次學(xué)術(shù)研討會(huì)論文集[C];2000年

相關(guān)重要報(bào)紙文章 前5條

1 本報(bào)記者 潘穎穎 周漢祥;S1線邀您入伙“幸福軌道”[N];溫州日?qǐng)?bào);2012年

2 本報(bào)記者 林乃鵬;市域鐵路S1線今年開(kāi)工[N];溫州日?qǐng)?bào);2011年

3 郭鐵成;榮譽(yù)S1測(cè)距相機(jī)[N];中國(guó)攝影報(bào);2006年

4 曉東　常蕾;上武高速S1標(biāo)施工不忘幫農(nóng)助農(nóng)[N];上饒日?qǐng)?bào);2009年

5 寇建東;S1上市 雙引擎驅(qū)動(dòng)廣汽本田[N];華夏時(shí)報(bào);2011年

相關(guān)博士學(xué)位論文 前1條

1 戴亞斌;雞傳染性支氣管炎病毒JS/95/03和SD/97/01株S1糖蛋白在昆蟲(chóng)細(xì)胞中的表達(dá)及其免疫原性評(píng)價(jià)[D];南京農(nóng)業(yè)大學(xué);2001年

相關(guān)碩士學(xué)位論文 前10條

1 余祖華;禽傳染性支氣管炎病毒S1基因在畢赤酵母中表達(dá)的研究[D];四川農(nóng)業(yè)大學(xué);2005年

2 王法軍;S1基因真核表達(dá)載體的構(gòu)建及農(nóng)桿菌轉(zhuǎn)化水稻的初步研究[D];首都師范大學(xué);2009年

3 王文成;雞嗜腎型傳染性支氣管炎病毒W(wǎng)株的分離、致弱及其S1基因序列的測(cè)定[D];中國(guó)人民解放軍軍需大學(xué);2002年

4 吳建祥;傳染性支氣管炎病毒S1基因在馬鈴薯中的表達(dá)[D];浙江大學(xué);2002年

5 謝紅梅;雞傳染性支氣管炎S1基因在大腸桿菌中的表達(dá)及其生物活性的初步鑒定[D];山東農(nóng)業(yè)大學(xué);2006年

6 方琳;豬傳染性胃腸炎病毒S1基因植物表達(dá)載體的構(gòu)建及轉(zhuǎn)化番茄的研究[D];南京農(nóng)業(yè)大學(xué);2009年

7 鄒年莉;四川部分地區(qū)雞傳染性支氣管炎病毒S1基因的遺傳進(jìn)化分析和原核表達(dá)[D];四川農(nóng)業(yè)大學(xué);2010年

8 張亮;2011-2012年雞傳染性支氣管炎病毒的分離鑒定及S1基因序列分析[D];河南農(nóng)業(yè)大學(xué);2013年

9 王瑋;雞傳染性支氣管炎病毒新疆分離株S1基因分子克隆及其重組雞痘病毒表達(dá)載體的構(gòu)建[D];新疆農(nóng)業(yè)大學(xué);2001年

10 封浪;酵母雙雜交、免疫共沉淀研究禽傳染性支氣管炎病毒S1、M蛋白相互作用[D];四川農(nóng)業(yè)大學(xué);2009年

，

本文編號(hào)：1666167