本文選題：豬鏈球菌　切入點(diǎn)：Rex　出處：《中國人獸共患病學(xué)報(bào)》2017年08期

【摘要】：目的克隆豬鏈球菌2型轉(zhuǎn)錄調(diào)控因子Rex的編碼基因進(jìn)行原核表達(dá)和純化,對其進(jìn)行生物信息學(xué)分析和體外結(jié)合活性測定。方法 PCR擴(kuò)增豬鏈球菌2型強(qiáng)毒株SS2-1的Rex基因編碼區(qū),將其克隆入pET28a質(zhì)粒中,再將pET28aRex重組質(zhì)粒轉(zhuǎn)入大腸桿菌表達(dá)菌BL21(DE3)中,重組菌株經(jīng)IPTG誘導(dǎo)后能表達(dá)出豬鏈球菌Rex蛋白;通過體外凝膠遷移實(shí)驗(yàn)(EMSA)對Rex蛋白與DNA的結(jié)合活性進(jìn)行分析。結(jié)果成功地原核表達(dá)并純化了Rex重組蛋白。Rex蛋白與自身啟動子Prex特異性結(jié)合,高濃度的NADH抑制兩者的結(jié)合活性,而NAD~+對結(jié)合沒有影響。結(jié)論通過體外結(jié)合試驗(yàn)發(fā)現(xiàn)Rex是通過響應(yīng)NADH/NAD~+平衡來調(diào)控自身基因的表達(dá)。
[Abstract]:Objective to clone the encoding gene of Streptococcus suis type 2 transcription regulator Rex for prokaryotic expression and purification. Methods the coding region of Rex gene of Streptococcus suis type 2 strain SS2-1 was amplified by PCR for bioinformatics analysis and in vitro binding assay. The recombinant plasmid was cloned into pET28a plasmid and then transferred into E. coli expression strain BL21DE3. The recombinant strain was induced by IPTG to express Rex protein of Streptococcus suis. The binding activity of Rex protein to DNA was analyzed by in vitro gel migration assay. Results the recombinant Rex protein. Rex protein was successfully expressed and purified to bind to its own promoter Prex. High concentration of NADH inhibited their binding activity. Conclusion the in vitro binding assay shows that Rex regulates the expression of its own genes by responding to the NADH / NAD- equilibrium.
【作者單位】： 江蘇省農(nóng)業(yè)科學(xué)院獸醫(yī)研究所·農(nóng)業(yè)部獸用生物制品工程技術(shù)重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室;南京農(nóng)業(yè)大學(xué)動物醫(yī)學(xué)院;江蘇省食品質(zhì)量安全重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室-省部共建國家重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室培育基地;
【基金】：國家轉(zhuǎn)基因生物新品種培育重大專項(xiàng)子課題(No.2014ZX0800946B-002) 國家公益性行業(yè)科研專項(xiàng)(No.201303041)~~
【分類號】：S852.611

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本文編號：1665242