本文選題：鼻氣管鳥(niǎo)疫桿菌　切入點(diǎn)：禽　出處：《中國(guó)獸醫(yī)學(xué)報(bào)》2017年03期

【摘要】：利用DNAStar對(duì)GenBank上發(fā)布的鼻氣管鳥(niǎo)桿菌(ORT)16S rRNA基因進(jìn)行序列分析,根據(jù)分析結(jié)果選擇其保守區(qū)域設(shè)計(jì)1對(duì)特異性的引物。擴(kuò)增16SRNA部分保守基因序列并將其克隆至pMD18-T載體,構(gòu)建重組質(zhì)粒,經(jīng)鑒定、純化后作為陽(yáng)性標(biāo)準(zhǔn)品,用于SYBR GreenⅠ實(shí)時(shí)熒光定量PCR標(biāo)準(zhǔn)曲線的建立。反應(yīng)條件反復(fù)優(yōu)化后,成功建立了檢測(cè)ORT的SYBR GreenⅠ實(shí)時(shí)熒光定量PCR方法。該方法對(duì)ORT的最低檢測(cè)量約為100拷貝數(shù)/μL,比普通PCR高100倍;與引起禽類呼吸系統(tǒng)疾病的其他病原體之間無(wú)交叉反應(yīng);批內(nèi)和批間試驗(yàn)的變異系數(shù)均小于0.63%,充分顯示該方法具有良好的重復(fù)性和穩(wěn)定性。對(duì)46份臨床樣本進(jìn)行ORT檢測(cè),該方法檢測(cè)的陽(yáng)性樣本為38份,檢出率為82.26%。在38份陽(yáng)性樣品中,普通PCR只檢出30份陽(yáng)性樣品,常規(guī)細(xì)菌培養(yǎng)只檢出23份陽(yáng)性樣品。結(jié)果表明:本試驗(yàn)建立的SYBR GreenⅠ實(shí)時(shí)熒光定量PCR方法比其他方法更敏感,為臨床上快速準(zhǔn)確的檢測(cè)、診斷禽類ORT的感染提供了敏感可靠的檢測(cè)方法。
[Abstract]:The 16s rRNA gene of Ortobacillus rhinotracheae published on GenBank was sequenced by DNAStar. According to the analysis results, a pair of specific primers were designed to amplify the partial conservative gene sequence of 16SRNA and clone it into pMD18-T vector. The recombinant plasmid was identified and purified as a positive standard for the establishment of SYBR Green 鈪，

本文編號(hào)：1665077