本文選題：黃芩苷　切入點(diǎn)：馬立克氏病病毒　出處：《聊城大學(xué)》2017年碩士論文

【摘要】：病毒性腫瘤病是一種自然性的常發(fā)病,嚴(yán)重的危害畜禽健康的重要疾病。腫瘤性疾病導(dǎo)致了畜禽的生產(chǎn)性能的下降,甚至死亡,對養(yǎng)殖戶的經(jīng)濟(jì)造成了嚴(yán)重的損失。家禽T細(xì)胞的淋巴瘤就是主要由馬立克氏病所引起,主要是對家禽體內(nèi)的病毒提取出的樣品進(jìn)行診斷,做出判斷。病毒是不斷變異并且發(fā)展著的,馬立克氏病的毒性也隨之增強(qiáng),疫苗的注射作用也是有局限性,所以,馬立克氏病的防控以后還會(huì)遇到更多挑戰(zhàn)。抗病毒方面,中藥有不易出現(xiàn)耐藥性、組分多、途徑多、靶點(diǎn)也多的獨(dú)特優(yōu)勢。據(jù)藥理學(xué)研究報(bào)道,具有抗微生物、抗病毒、保肝、利膽和鎮(zhèn)靜等作用的黃芩苷,具有很好的臨床應(yīng)用價(jià)值。為了深入探討黃芩苷的生物學(xué)活性,本研究擬探討黃芩苷的提取工藝,建立黃芩苷的質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn);以雞馬立克氏病為模型,進(jìn)行黃芩苷體外、體內(nèi)抗馬立克氏病病毒試驗(yàn),系統(tǒng)研究黃芩苷的抗病毒活性,并進(jìn)一步闡明其作用機(jī)理,為臨床獲取能有效控制病毒所致腫瘤性疾病的黃酮類化合物提供依據(jù),試驗(yàn)結(jié)果如下:1、黃芩苷含量測定方法建立:采用紫外分光光度法,以黃芩苷的標(biāo)準(zhǔn)品為原料,278nm處測定其吸光度,建立吸光度和濃度的標(biāo)準(zhǔn)曲線。黃芩苷標(biāo)準(zhǔn)曲線為A=0.0625C+0.005,R~2=0.9995。精密性、穩(wěn)定性、重復(fù)性、加樣回收均符合要求。2、正交設(shè)計(jì)法優(yōu)選黃芩苷的提取工藝:采用熱水煎煮提取法,通過三水平三因素的正交試驗(yàn)優(yōu)化其提取因素,方差分析結(jié)果顯示,提取次數(shù)為2次,料液比為1:25,煎煮時(shí)間為50 min時(shí),黃芩苷的提取率最高,達(dá)到20.36%。3、黃芩苷對雞胚成纖維細(xì)胞(CEF)最大安全濃度的測定:黃芩苷在中、低濃度能夠促進(jìn)CEF細(xì)胞的貼壁和生長且對CEF細(xì)胞的作用都是具有時(shí)效性的,應(yīng)用了細(xì)胞病變的觀察法和MTT法,測得了黃芩苷對CEF最大的安全濃度為312.5μg/mL。4、MDV細(xì)胞半數(shù)感染量(TCID_(50))測定:MDV的半數(shù)感染量TCID_(50)為10~(-4.5)/0.1 mL。5、黃芩苷體外抗MDV作用結(jié)果:增值抑制、感染阻斷和直接殺滅三種不同給藥途徑下,黃芩苷濃度在78.13~312.5μg/mL范圍時(shí)都具有較好的抗病毒感染作用,并且感染阻斷途徑下黃芩苷濃度為156.25~312.5μg/mL時(shí)能夠促進(jìn)細(xì)胞的生長、直接滅活途徑下,黃芩苷在濃度312.5μg/mL的時(shí)候能夠促進(jìn)細(xì)胞的生長。6、黃芩苷體內(nèi)抗MDV作用結(jié)果:(1)通過利巴韋林組,黃芩苷高、中、低劑量組,病毒感染對照組的統(tǒng)計(jì),正常對照組的死亡日齡數(shù)、腫瘤發(fā)生率、試驗(yàn)前后雞體重變化情況等,明顯得出黃芩苷高、中劑量組對病毒延緩發(fā)生優(yōu)于陽性對照組和黃芩苷的低劑量組;(2)通過觀察各組器官組織切片,也能直觀的說明黃芩苷組能夠降低MDV感染的病變程度。綜上所述,正交法優(yōu)化的黃芩苷提取工藝方法更加合理,得到了較高提取率的黃芩苷,用于臨床上的延緩馬立克氏病病毒的感染,并且通過將馬立克氏病作為研究動(dòng)物腫瘤病的模型進(jìn)行研究,中藥黃芩苷對動(dòng)物腫瘤病的治療是有開發(fā)前景的。
[Abstract]:Viral tumor disease is a natural common diseases, diseases of livestock and poultry. Serious health hazards of neoplastic diseases has decreased, the production performance of livestock and poultry and even death, causing serious losses to the farmers economy. Poultry T cells lymphoma is mainly caused by Marek's disease, mainly the poultry virus extracted samples for diagnosis, judge. The virus is constantly variation and development of Marek's disease, the toxicity also increases, injection of vaccine effect is limited, therefore, the prevention and control of Marek's disease will encounter more challenges. Traditional Chinese medicine has antiviral, not prone to drug resistance multi component, multi way, and also the unique advantages of targets. According to pharmacological research reports, antimicrobial, antiviral, liver, gallbladder and sedative effects of baicalin, has good clinical should Use value. In order to study the biological activity of baicalin, this study intends to explore the extraction process of baicalin, to establish a quality standard of baicalin; in Marek's disease model of Baicalin in vitro and in vivo anti Marek's disease virus test system of baicalin antiviral activity, and to further elucidate its mechanism and provide the basis of flavonoids obtained can effectively control the virus induced tumor disease for clinical and experimental results are as follows: 1, establish the method to determine the content of baicalin: by UV spectrophotometry, using standard baicalin as raw material, 278nm absorbance, establishing a standard curve of absorbance and concentration of glycosides. The standard curve of Baicalin was A=0.0625C+0.005, R~2=0.9995. precision, stability, repeatability and recovery are in line with the requirements of.2, the extraction process of baicalin by orthogonal design: the use of hot water boiling extraction The method, by optimizing the extraction factors of orthogonal test of three factors and three levels, the variance analysis results showed that the extraction times is 2, the ratio of liquid to 1:25, decoction time was 50 min, the extraction rate of baicalin is the highest, reaching 20.36%.3, baicalin in chick embryo fibroblast (CEF) determination of the maximum safe concentration the baicalin in low concentration can promote CEF cell adhesion and growth of CEF cells and the role of timeliness of the application, the cellular pathological observation method and MTT method, obtained CEF safety of Baicalin on the maximum concentration of 312.5 g/ mL.4, MDV cells (MID50 TCID_ (50): MDV) by MID50 TCID_ (50) 10~ (-4.5) /0.1 mL.5, the anti MDV effect of Baicalin in vitro proliferation, infection blocking and killing three different routes of administration, concentrations of baicalin has better antiviral in the range of g/mL 78.13~ 312.5 Effect of infection, and the infection blocking concentrations of baicalin was 156.25~312.5 ~ g/mL pathway can promote cell growth, direct inactivation pathway, baicalin can promote the growth of.6 cells when the concentration of 312.5 g/mL, the anti MDV effect of Baicalin in vivo results: (1) by Leigh Bhave Lin group, baicalin, in the low dose group, control group, statistical virus infections, death age number of normal control group, the incidence of tumors before and after testing chicken weight changes, baicalin was obtained in high dose group delay than the positive control group and baicalin low dose group of virus; (2) through the observation each organ section, can also be that baicalin group can reduce the severity of MDV infection. In conclusion, the orthogonal method to optimize the extraction process of baicalin was more reasonable, high extraction rate of baicalin, for clinical. In order to delay the infection of Marek's disease virus and study Marek's disease as a model of animal tumor, baicalin has potential for the treatment of animal tumor.

【學(xué)位授予單位】：聊城大學(xué)
【學(xué)位級別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2017
【分類號】：S853.74

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本文編號：1663810