本文選題：鵪鶉　切入點(diǎn)：禽腦脊髓炎病毒　出處：《西北農(nóng)林科技大學(xué)》2017年碩士論文　論文類型：學(xué)位論文

【摘要】：禽腦脊髓炎(Avian encephalomyelitis,AE)是由禽腦脊髓炎病毒(Avian encephalomyelitis virus,AEV)引起的一種主要侵害幼禽中樞神經(jīng)系統(tǒng)的接觸性傳染病。AEV為無(wú)囊膜單股正鏈RNA病毒,屬于小RNA病毒科,震顫病毒屬。該病目前只能依靠疫苗免疫進(jìn)行防控,因此,運(yùn)用靈敏準(zhǔn)確的方法測(cè)定AEV在鵪鶉體內(nèi)的動(dòng)態(tài)分布對(duì)于AE的致病性研究及其防治具有重要作用。本研究對(duì)鵪鶉源AEV進(jìn)行分離鑒定,并運(yùn)用熒光定量PCR技術(shù)和免疫組織化學(xué)試驗(yàn)檢測(cè)AEV XY/Q-1410株口服感染1日齡鵪鶉后病毒在其體內(nèi)的分布情況,結(jié)果如下:1.2014年10月采集陜西省咸陽(yáng)市某鵪鶉養(yǎng)殖場(chǎng)AE疑似病料,經(jīng)雞胚傳代、RT-PCR擴(kuò)增、中和試驗(yàn)及動(dòng)物回歸試驗(yàn)對(duì)病原體進(jìn)行分離鑒定。RT-PCR擴(kuò)增結(jié)果顯示,用AEV特異性引物成功擴(kuò)增到大小為288 bp的目的片段,與參考株核苷酸序列相似性及推導(dǎo)的氨基酸序列相似性分別為84.9%~99.3%和95.8%~98.9%;遺傳進(jìn)化分析表明,分離株與SX株位于同一分支;中和試驗(yàn)結(jié)果顯示,中和指數(shù)為102.32,大于50,為陽(yáng)性;動(dòng)物回歸試驗(yàn)結(jié)果顯示,攻毒組鵪鶉及雛雞均出現(xiàn)典型的AE臨床癥狀,攻毒組鵪鶉發(fā)病率55.1%,病死率100%,攻毒組雛雞發(fā)病率60%,病死率58.3%,病理剖檢發(fā)現(xiàn)患病動(dòng)物的腦組織軟化,腦半球輪廓變模糊,對(duì)照組未見異常。本研究成功分離到一株鵪鶉源AEV,命名為AEV XY/Q-1410株。2.標(biāo)準(zhǔn)曲線的建立。通過(guò)TIANLONG 988熒光定量PCR系統(tǒng)對(duì)10倍遞比稀釋的重組質(zhì)粒標(biāo)準(zhǔn)品(102~108 copies/μL)產(chǎn)生的循環(huán)數(shù)與擴(kuò)增子對(duì)數(shù)濃度的線性回歸分析得到標(biāo)準(zhǔn)曲線:曲線斜率為-3.325,相關(guān)系數(shù)(R2)為0.9978。檢測(cè)限度為100拷貝。3.用熒光定量PCR技術(shù)測(cè)定AEV在鵪鶉體內(nèi)的動(dòng)態(tài)分布。運(yùn)用熒光定量PCR技術(shù)測(cè)定AEV XY/Q-1410株接種鵪鶉后第3天~17天(間隔1天),18天~25天(每天),29天,30天,32天,36天~48天(間隔1天),49天,51天~60天(每天)在鵪鶉大腦、小腦、腺胃、腸道、肝臟、胰腺、脾臟、法氏囊、肺臟、腎臟等器官中的病毒載量。結(jié)果顯示,病毒在多數(shù)組織中可以持續(xù)感染長(zhǎng)達(dá)60天。大腦和小腦中的病毒載量逐漸升高至第18天達(dá)到第一個(gè)峰值,第二個(gè)峰值分別出現(xiàn)在攻毒后第51天和46天。腺胃、腸道、脾臟和法氏囊中的病毒載量高于大腦和小腦。腺胃中的病毒載量從第3天至第46天呈“U”型,之后逐漸降低至第52天,之后保持穩(wěn)定至第60天;腸道中的病毒載量從第3天至第46天呈“M”型,之后保持穩(wěn)定至第60天;肝臟中病毒載量波動(dòng)較劇烈,最大值出現(xiàn)在第52天;胰腺中的病毒載量通常低于100拷貝。脾臟中的病毒載量從第3天至第54天呈“W”型,之后緩慢下降至第60天;法氏囊中的病毒載量從第3天至第44天呈“U”型,然后下降至第49天,之后病毒載量小幅度波動(dòng)至第60天。肺臟中的病毒載量整體呈兩個(gè)“M”型相連。腎臟中的病毒載量?jī)H在第7天出現(xiàn)一個(gè)峰值,從第15天至第60天保持輕微波動(dòng)。4.用免疫組織化學(xué)試驗(yàn)檢測(cè)AEV的組織分布。運(yùn)用免疫組織化學(xué)試驗(yàn)來(lái)檢測(cè)攻毒后第7天,18天,36天,54天和59天所采集的各組織器官中病毒粒子的分布并結(jié)合Image-Pro Plus軟件來(lái)計(jì)算各時(shí)間點(diǎn)各組織器官中病毒蛋白相對(duì)表達(dá)量。結(jié)果顯示,五個(gè)時(shí)間點(diǎn)所采集的組織器官中均有明顯的棕黃色陽(yáng)性染色,而陰性對(duì)照沒(méi)有。將各組織器官中病毒蛋白相對(duì)表達(dá)量與病毒載量進(jìn)行相關(guān)性分析,結(jié)果顯示,二者呈正相關(guān)。綜上所述,AEV XY/Q-1410株與SX株親緣關(guān)系最近,而與L2Z株、YL株、1143株、Van Reokel株和Pf-CHK1/AEV株親緣關(guān)系較遠(yuǎn),表明AEV XY/Q-1410株與參考株相比,在遺傳進(jìn)化上存在一定差異。熒光定量PCR結(jié)果表明,AEV可持續(xù)感染長(zhǎng)達(dá)60天,腺胃,腸道,脾臟和法氏囊中的病毒載量高于大腦和小腦。相關(guān)性分析結(jié)果表明,各組織器官中的病毒基因拷貝數(shù)與病毒蛋白相對(duì)表達(dá)量呈正相關(guān)。
[Abstract]:......
【學(xué)位授予單位】：西北農(nóng)林科技大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2017
【分類號(hào)】：S858.39

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本文編號(hào)：1647995