本文選題：藏豬　切入點(diǎn)：胰島素樣生長因子　出處：《華北農(nóng)學(xué)報(bào)》2017年01期 　論文類型：期刊論文

【摘要】：旨在克隆藏豬胰島素樣生長因子1(IGF-1)的成熟肽基因,并進(jìn)行原核表達(dá)的研究。提取藏豬肝臟組織RNA,通過RT-PCR擴(kuò)增出藏豬IGF-1全長基因,構(gòu)建重組質(zhì)粒p MD19-T-IGF-1,以p MD19-T-IGF-1質(zhì)粒為模板,克隆IGF-1成熟肽序列并構(gòu)建成熟肽p ET-32α-IGF-1表達(dá)質(zhì)粒,轉(zhuǎn)入大腸桿菌BL21(DE3),對IPTG誘導(dǎo)劑濃度和誘導(dǎo)時間進(jìn)行優(yōu)化,Ni-NTA瓊脂純化融合蛋白后采用Western Blot對其鑒定。結(jié)果顯示,IGF-1成熟肽基因(315 bp),成功構(gòu)建了成熟肽p ET-32α-IGF-1原核表達(dá)質(zhì)粒;重組大腸桿菌BL21-IGF-1以包涵體形式表達(dá)出分子量約31 k Da融合蛋白,最優(yōu)IPTG濃度為0.5 mmol/L,最佳IPTG誘導(dǎo)時間為10 h;純化獲得了高純度的融合蛋白,經(jīng)鑒定IPTG誘導(dǎo)表達(dá)和純化的蛋白為IGF-1融合蛋白。結(jié)果表明,成功構(gòu)建了表達(dá)質(zhì)粒p ET32α-IGF-1及獲得重組大腸桿菌BL21-IGF-1,表達(dá)了藏豬IGF-1成熟肽融合蛋白及該蛋白具有抗原抗體反應(yīng)活性。
[Abstract]:In order to clone porcine insulin-like growth factor 1 (IGF-1) of the mature peptide gene, and study the prokaryotic expression. The extraction of Tibet pig liver tissue RNA, RT-PCR amplified with IGF-1 gene of Tibet pig, the recombinant plasmid P MD19-T-IGF-1 to P MD19-T-IGF-1 plasmid as template to clone IGF-1 mature peptide sequence and construct mature peptide p ET-32 alpha -IGF-1 expression plasmid was transformed into Escherichia coli BL21 (DE3), the IPTG concentration of inducer and induction time were optimized. The fusion protein was purified by Ni-NTA agar Western Blot for its identification. The results showed that the mature peptide of IGF-1 gene (315 BP), the successful construction of P mature peptide ET-32 alpha -IGF-1 prokaryotic expression plasmid BL21-IGF-1; recombinant Escherichia coli expressed in form of inclusion bodies with molecular weight of approximately 31 K Da fusion protein, the optimal concentration of IPTG was 0.5 mmol/L, the best induction time of IPTG was 10 h; the fusion protein was purified by high purity, identification The IPTG induced and expressed protein was IGF-1 fusion protein. The results showed that the expression plasmid P ET32 -IGF-1 and the recombinant Escherichia coli BL21-IGF-1 were successfully constructed, and the fusion protein of IGF-1 mature peptide was expressed, and the protein had antigen antibody reactivity.

【作者單位】： 四川農(nóng)業(yè)大學(xué)動物醫(yī)學(xué)院動物微生態(tài)研究中心;成都農(nóng)業(yè)科技職業(yè)學(xué)院;
【基金】：四川省高等學(xué)�？萍紕�(chuàng)新團(tuán)隊(duì)資助項(xiàng)目(KM406183.1) 全國大學(xué)生創(chuàng)新訓(xùn)練計(jì)劃項(xiàng)目(201410626028)
【分類號】：Q78;S828

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