本文選題：副豬嗜血桿菌(HPS)　切入點(diǎn)：轉(zhuǎn)鐵結(jié)合蛋白A(TbpA)　出處：《安徽農(nóng)業(yè)大學(xué)》2015年碩士論文　論文類型：學(xué)位論文

【摘要】：副豬嗜血桿菌(Haemophilus parasuis, HPS)是豬上呼吸道的一種常在菌,是豬革拉斯氏病(Glasser's disease)的病原菌。近年來由HPS引起的以豬纖維素性多發(fā)性漿膜炎、關(guān)節(jié)炎、腦膜炎、呼吸困難、高熱及高死亡率為特征的傳染性疾病呈現(xiàn)逐年上升的趨勢(shì)。該病已成為影響全球養(yǎng)豬業(yè)最為嚴(yán)重的細(xì)菌性傳染病之一,給養(yǎng)豬業(yè)帶來了一定的經(jīng)濟(jì)損失。在控制副豬嗜血桿菌病方面,通常采用藥物防治和疫苗接種等。然而長(zhǎng)期大量使用抗菌藥物,促使HPS的耐藥譜逐漸拓寬,多重耐藥現(xiàn)象日益嚴(yán)重；同時(shí)HPS血清型眾多,各型菌株間的毒力及致病性差異都很大,且相互之間缺乏有效的交叉保護(hù)力,致使HPS滅活疫苗的保護(hù)效果十分有限。前期的研究結(jié)果顯示,HPS轉(zhuǎn)鐵結(jié)合蛋白(TbpA)不僅具有良好的免疫活性,而且對(duì)豚鼠具有良好的免疫保護(hù)及交叉免疫保護(hù)效力。本研究利用重組TbpA蛋白和血清型13型HPS全菌體滅活苗免疫仔豬,通過檢測(cè)免疫后仔豬的HPS抗體水平和細(xì)胞因子(EL-5、IL-10、IFN-γ、TNF-α)水平,觀察攻毒后仔豬的采食量、直腸溫度、精神狀態(tài)及死亡率,并進(jìn)行病理組織學(xué)觀察,旨在探討TbpA蛋白對(duì)仔豬的免疫保護(hù)作用,為HPS新型亞單位疫苗的研究及副豬嗜血桿菌病的防控提供科學(xué)依據(jù)。首先,選取15頭42日齡左右HPS抗體陰性健康大白仔豬,通過Reed-Muench法測(cè)定13型HPS的半數(shù)致死量。其次,選取25頭14日齡左右HPS抗體陰性健康大白仔豬,隨機(jī)分為5組(編號(hào)為A、B、C、D、E),每組5頭。A、B兩組注射TbpA,劑量分別為2mg、lmg; C組注射13型HPS全菌體滅活苗1mL；D組和E組注射PBS 1mL;佐劑均為弗氏佐劑,接種方法均為頸部肌肉注射。共免疫3次,免疫間隔時(shí)間均為14天。一免和二免14天后、三免10天后分別采集仔豬血液,分離血清。應(yīng)用ELISA方法檢測(cè)HPS抗體水平和細(xì)胞因子(IL-5、 IL-10、IFN-γ、TNF-α)水平。三免10天后用HPS血清型13型菌株以7LD50劑量對(duì)仔豬進(jìn)行腹腔攻毒,測(cè)定其免疫保護(hù)性,并對(duì)每組仔豬的肺臟和脾臟進(jìn)行病理組織學(xué)觀察。結(jié)果顯示,一免后,TbpA免疫組、全菌體滅活苗免疫組HPS抗體水平和細(xì)胞因子水平相對(duì)于對(duì)照組差異不顯著(P0.05)；二免后,TbpA免疫組HPS抗體水平和細(xì)胞因子水平相對(duì)于對(duì)照組差異不顯著(P0.05),而全菌體滅活苗免疫組HPS抗體水平顯著高于對(duì)照組(P0.05)；三免后,TbpA免疫組、全菌體滅活苗免疫組的HPS抗體水平和細(xì)胞因子水平都顯著高于對(duì)照組(P0.05),且TbpA免疫組HPS抗體水平顯著高于二免抗體水平(P0.05)。三免后第10天以HPS血清型13型菌株7LD50劑量分別對(duì)A、B、C、D這4組仔豬腹腔攻毒后,A、C組仔豬存活率為100%,B組仔豬存活率為40%,D組仔豬存活率為0%。A、C、E組仔豬和B組存活的仔豬肺臟和脾臟組織樣品的病理學(xué)損傷程度與D組和B組死亡的仔豬差異明顯。結(jié)果表明,HPS的TbpA蛋白對(duì)仔豬能夠產(chǎn)生免疫保護(hù)力,其中2mg免疫劑量、免疫3次,與全菌體滅活苗對(duì)同源菌株攻毒的免疫保護(hù)力相同,均為100%。
[Abstract]:Haemophilus parasuis (HPS) is a common bacteria in the upper respiratory tract of pigs. It is the pathogen of Glassers disease of swine Graves disease. In recent years, it is caused by HPS caused by cellulosic polyserositis, arthritis, meningitis, dyspnea. Infectious diseases characterized by high fever and high mortality are on the rise year by year. The disease has become one of the most serious bacterial infectious diseases affecting the pig industry in the world. In the control of Haemophilus parasuis disease, drug control and vaccination are usually used. However, a large number of antibiotics are used for a long time, which makes the drug resistance spectrum of HPS widen gradually. The phenomenon of multidrug resistance is becoming more and more serious, at the same time, there are many serotypes of HPS, the virulence and pathogenicity of each strain are very different, and there is a lack of effective cross-protection between each other. Therefore, the protective effect of HPS inactivated vaccine is very limited. Previous studies have shown that TbpA not only has good immunological activity, but also has good immunological activity. In this study, recombinant TbpA protein and serum type 13 HPS inactivated vaccine were used to immunize piglets. The levels of HPS antibody and cytokine EL-5 IL-10 IFN- 緯 TNF- 偽 were detected in piglets after immunization. The feeding intake, rectal temperature, mental state and mortality of piglets after poisoning were observed, and histopathological observation was carried out in order to investigate the immune protective effect of TbpA protein on piglets. To provide scientific basis for the study of new subunit vaccine of HPS and the prevention and control of Haemophilus parasuis disease. Firstly, 15 healthy white piglets with negative HPS antibody for 42 days were selected and the lethal dose of type 13 HPS was determined by Reed-Muench method. A total of 25 healthy white piglets with negative HPS antibody at 14 days old were selected. The mice were randomly divided into five groups (group A, n = 5), group A (n = 5), group A (n = 5), TbpA at a dose of 2 mg / mg, group C, group C, injection of PBS 1 mL of 13 type HPS inactivated vaccine, group D and group E, all adjuvants were Freund's adjuvant and inoculated by intramuscular injection of TbpA. The interval of immunization was 14 days. After 14 days of immunization, the blood of piglets were collected after 10 days of three immunizations. Serum samples were isolated. The levels of HPS antibody and cytokines IL-5, IL-10 IFN- 緯 TNF- 偽 were detected by ELISA method. After 10 days, the piglets were inoculated with HPS serotype 13 strain at the dose of 7LD50 to detect the immune protection. The lung and spleen of each group were observed by histopathology. The levels of HPS antibody and cytokines in the whole bacterial inactivated vaccine group were not significantly different from those in the control group, while the levels of HPS antibody and cytokines in the TbpA immunized group were not significantly different from those in the control group, but the total bacterial inactivation was not significant. The level of HPS antibody in the vaccine immunized group was significantly higher than that in the control group (P 0.05). The levels of HPS antibody and cytokine in the whole bacterial inactivated vaccine immunized group were significantly higher than those in the control group (P0.05), and the HPS antibody level in the TbpA immunized group was significantly higher than that in the second immune antibody level (P0.05). On the 10th day after the third immunization, the dosage of HPS serotype 13 strain 7LD50 was used. The survival rate of four groups of piglets after intraperitoneal attack was 100% and the survival rate of group B was 40%. The survival rate of group D was 0 and that of group B was 0. The pathological damage of lung and spleen tissue samples of group B and group B were higher than that of group D. The results showed that the TbpA protein of HPS could protect the piglets. The dose of 2 mg immunized for 3 times was the same as that of the whole bacterial inactivated vaccine (100%).
【學(xué)位授予單位】：安徽農(nóng)業(yè)大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2015
【分類號(hào)】：S858.28

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本文編號(hào)：1612668