發(fā)布時(shí)間：2018-03-10 21:09

  本文選題：生長(zhǎng)抑制素　切入點(diǎn)：pET-32a表達(dá)系統(tǒng)　出處：《上海海洋大學(xué)》2015年碩士論文　論文類型：學(xué)位論文

【摘要】：構(gòu)建帶有生長(zhǎng)抑制素的p ET-32a-2SS28-SS14和p ET-32a-3SS28原核表達(dá)質(zhì)粒并檢測(cè)其在大腸桿菌中的表達(dá),并用所表達(dá)的目的蛋白制成生長(zhǎng)抑制素亞單位疫苗,將該疫苗免疫小鼠,研究其對(duì)小鼠生長(zhǎng)的影響,探討生長(zhǎng)抑制素亞單位疫苗免疫小鼠后對(duì)促進(jìn)生長(zhǎng)效果的性別差異性,并研究生長(zhǎng)抑制素不同亞型串聯(lián)后對(duì)促進(jìn)小鼠生長(zhǎng)的不同效果。為研究獲得經(jīng)濟(jì)高效的生長(zhǎng)抑制素亞單位疫苗,以提高經(jīng)濟(jì)動(dòng)物的生產(chǎn)效率。1.p ET-32a-2SS28-SS14和p ET-32a-3SS28原核表達(dá)質(zhì)粒的構(gòu)建選用生長(zhǎng)抑制素的兩種亞型SS-14和SS-28,將其混合串聯(lián)到p ET-32a表達(dá)系統(tǒng)中,得到p ET-32a-2SS28-SS14和p ET-32a-3SS28兩種重組質(zhì)粒。并通過(guò)PCR擴(kuò)增和測(cè)序鑒定表明,目的基因在p ET-32a質(zhì)粒中的插入位點(diǎn),序列以及方向完全正確。2.2SS28-SS14和3SS28目的蛋白的表達(dá)與純化將p ET-32a-2SS28-SS14和p ET-32a-3SS28兩種重組質(zhì)粒轉(zhuǎn)化到E.coli BL21 De3中,通過(guò)IPTG誘導(dǎo)大腸桿菌介導(dǎo)表達(dá)出目的蛋白,并通過(guò)western blot分析鑒定,所表達(dá)蛋白為目的蛋白。將菌體超聲破碎后離心對(duì)目的蛋白進(jìn)行可溶性分析以后,將上清進(jìn)行蛋白純化,獲得純化的目的蛋白。3.生長(zhǎng)抑制素亞單位疫苗的制備以及動(dòng)物免疫將誘導(dǎo)純化的目的蛋白與佐劑混合乳化制成生長(zhǎng)抑制素亞單位疫苗,免疫小鼠,選用4周齡離乳昆明鼠60只,雌雄各半。將雌雄各隨機(jī)分3組,每組10只,對(duì)每只做好編號(hào)標(biāo)記。按如下分組進(jìn)行免疫:2SS28-SS14♀:免疫2SS28-SS14蛋白的雌鼠;2SS28-SS14♂:免疫2SS28-SS14蛋白的雄鼠;328AA♀:免疫3SS28蛋白的雌鼠;328AA♂:免疫3SS28蛋白的雄鼠;空白♀:注射生理鹽水白油乳化溶液的雌鼠;空白♂:注射生理鹽水白油乳化溶液的雄鼠。對(duì)4周齡的小鼠初始體重的測(cè)定記錄,并對(duì)其進(jìn)行首次免疫。實(shí)驗(yàn)組每只小鼠免疫100ug蛋白量的相應(yīng)劑量疫苗,對(duì)照組注射等劑量的生理鹽水白油乳化溶液對(duì)照。1周后再進(jìn)行一次加強(qiáng)免疫,實(shí)驗(yàn)組每只小鼠免疫50ug蛋白量的相應(yīng)劑量疫苗,對(duì)照組注射等劑量的生理鹽水白油乳化溶液對(duì)照。從4周齡開(kāi)始到7周齡,每周對(duì)小鼠體重做一次稱重記錄。采用SPSS進(jìn)行統(tǒng)計(jì)學(xué)分析。免疫兩種疫苗的雌鼠的實(shí)驗(yàn)組與空白對(duì)照組平均增重相比,差異均不顯著(P0.05)。免疫3SS28疫苗的雄鼠實(shí)驗(yàn)組與空白對(duì)照組平均增重相比,免疫后第1、第2周體重增加不顯著(p0.05),第3周平均增重顯著高于空白對(duì)照組(P0.05)。免疫2SS28-SS14疫苗的雄鼠實(shí)驗(yàn)組與空白對(duì)照組平均增重相比,免疫后第1、第2周平均增重顯著高于空白對(duì)照組(p0.05),第3周差異極為顯著(P0.01)。說(shuō)明生長(zhǎng)抑制素不同亞型的亞單位疫苗對(duì)昆明鼠生長(zhǎng)影響性別差異性較大;從雄鼠的增重效果來(lái)看,SS-14亞型的免疫增重效果優(yōu)于SS-28亞型,說(shuō)明生長(zhǎng)抑制素不同亞型的免疫原性有所差異,導(dǎo)致免疫效果的不同。綜上所述,本研究通過(guò)基因克隆技術(shù)成功重組構(gòu)建p ET-32a-2SS28-SS14和p ET-32a-3SS28原核表達(dá)質(zhì)粒并檢測(cè)其在大腸桿菌中表達(dá)。并將表達(dá)的目的蛋白純化后制備成生長(zhǎng)抑制素亞單位疫苗免疫小鼠,發(fā)現(xiàn)免疫3SS28疫苗的雄鼠實(shí)驗(yàn)組與空白對(duì)照組平均增重相比差異顯著(P0.05)。免疫2SS28-SS14疫苗的雄鼠實(shí)驗(yàn)組與空白對(duì)照組平均增重相比差異極為顯著(P0.01)。而兩種疫苗對(duì)雌鼠均無(wú)明顯差異性。因此本次研究為獲得經(jīng)濟(jì)高效的生長(zhǎng)抑制素亞單位疫苗和后續(xù)將生長(zhǎng)抑制素亞單位疫苗應(yīng)用到動(dòng)物生產(chǎn)提供了理論基礎(chǔ)和方向。
[Abstract]:......
【學(xué)位授予單位】：上海海洋大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2015
【分類號(hào)】：S852.4

【參考文獻(xiàn)】

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本文編號(hào)：1595080