發(fā)布時間：2018-03-06 23:16

  本文選題：牦牛　切入點：輸卵管上皮細(xì)胞　出處：《甘肅農(nóng)業(yè)大學(xué)》2015年碩士論文　論文類型：學(xué)位論文

【摘要】：本研究以牦牛為研究對象,首先改進(jìn)了輸卵管上皮細(xì)胞體外培養(yǎng)方法;其次在此基礎(chǔ)上,探討了促卵泡生成素(FSH)對牦牛輸卵管上皮細(xì)胞分泌特異性糖蛋白的影響。以幾種不同消化酶分離、純化,最終成功地體外培養(yǎng)了牦牛輸卵管上皮細(xì)胞,并對該細(xì)胞進(jìn)行了免疫學(xué)鑒定和分析。體外分離培養(yǎng)的牦牛輸卵管上皮細(xì)胞,在細(xì)胞中添加不同濃度的FSH;運用熒光定量PCR技術(shù),分析輸卵管特異性糖蛋白的m RNA的表達(dá)水平,并對其分泌輸卵管蛋白的部位,用細(xì)胞免疫標(biāo)記進(jìn)行分析。研究結(jié)果表明:(1)牦牛輸卵管上皮細(xì)胞的最佳培養(yǎng)方法是胰蛋白酶和膠原蛋白酶共同作用分離純化細(xì)胞,用該方法培養(yǎng)的細(xì)胞株較純,純度接近90%.(2)從生長曲線可以看出,該細(xì)胞在第一天到第三天生長緩慢,第四天到第五天呈指數(shù)生長趨勢,從第六天開始,增值又變緩。(3)所培養(yǎng)的所有輸卵管上皮細(xì)胞細(xì)胞都表達(dá)輸卵管特異性糖蛋白,且主要由細(xì)胞質(zhì)表達(dá)。(4)當(dāng)FSH的濃度為0.5~5μg/mL時,輸卵管蛋白的表達(dá)量隨著FSH濃度的上升而增加;在5μg/mL的FSH作用后,輸卵管蛋白的m RNA表達(dá)量最高,濃度超過10μg/mL時,輸卵管蛋白基因的表達(dá)量降低。本研究成功地體外培養(yǎng)了牦牛輸卵管上皮細(xì)胞,并發(fā)現(xiàn)FSH具有促進(jìn)輸卵管上皮細(xì)胞分泌輸卵管特異性糖蛋白的作用,且具有劑量依賴性。該結(jié)果為解決牦牛的繁殖率和胚胎移植的存活率低,以及為了給進(jìn)一步開展牦牛生殖生理研究提供了理論依據(jù)。
[Abstract]:In this study, yak was used as the research object. Firstly, the culture method of oviduct epithelial cells in vitro was improved; secondly, on the basis of this, The effects of follicle stimulating hormone (FSH) on the secretion of specific glycoproteins by yak oviductal epithelial cells were studied. The yak oviduct epithelial cells were successfully cultured in vitro by the isolation and purification of several digestive enzymes. The cells were identified and analyzed by immunology. Different concentrations of FSHs were added to the cultured yak oviductal epithelial cells in vitro, and the expression level of m RNA of oviduct specific glycoprotein was analyzed by fluorescence quantitative PCR technique. The results showed that the best culture method of yak oviduct epithelial cells was to isolate purified cells by the interaction of trypsin and collagenase. From the growth curve, we can see that the cells grow slowly from the first day to the third day, and the growth trend is exponential from 4th days to 5th days, starting from 6th days. Oviductal specific glycoprotein was expressed in all oviductal epithelial cells cultured in vitro, and mainly expressed by cytoplasm. When the concentration of FSH was 0.5 渭 g / mL, the expression of tubal protein increased with the increase of FSH concentration. After the treatment of 5 渭 g / mL of FSH, the expression of m RNA in oviduct protein was the highest, and when the concentration was more than 10 渭 g / mL, the expression of oviduct protein gene decreased. In this study, yak oviduct epithelial cells were successfully cultured in vitro. It was found that FSH could promote the secretion of oviduct specific glycoprotein by oviductal epithelial cells in a dose-dependent manner. In order to provide theoretical basis for further research on reproductive physiology of yak.
【學(xué)位授予單位】：甘肅農(nóng)業(yè)大學(xué)
【學(xué)位級別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2015
【分類號】：S823.85

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本文編號：1576925