發(fā)布時(shí)間：2018-03-06 23:02

  本文選題：間接ELISA　切入點(diǎn)：豬鼻支原體　出處：《畜牧獸醫(yī)學(xué)報(bào)》2017年10期 　論文類型：期刊論文

【摘要】：豬鼻支原體是豬體內(nèi)的一種常在菌,可引發(fā)豬的多發(fā)性漿膜炎、肺炎、關(guān)節(jié)炎、心包炎等炎癥。由于豬鼻支原體與豬其他支原體有較高的交叉反應(yīng),目前并沒(méi)有特異性的血清學(xué)診斷方法的報(bào)道。本試驗(yàn)以建立豬鼻支原體特異性ELISA檢測(cè)方法為目的,將豬鼻支原體的表面可變脂蛋白Vlp的特定肽段作為包被抗原,優(yōu)化該方法檢測(cè)條件,最終確定:其抗原的最佳包被濃度為0.312 5μg·mL~(-1);一抗的最佳稀釋度為1∶100,作用時(shí)間為30min;二抗的最佳稀釋濃度為1∶20 000,最佳作用時(shí)間為30min;顯色時(shí)間為10min;陰陽(yáng)性的判定值為0.27。交叉性試驗(yàn)結(jié)果顯示,Vlp抗原與豬其他支原體陽(yáng)性血清及豬常見(jiàn)傳染病陽(yáng)性血清均無(wú)交叉反應(yīng)。在重現(xiàn)性試驗(yàn)中,批內(nèi)及批間的變異系數(shù)均低于10%,證明重現(xiàn)性良好。利用所建立的方法對(duì)已知陰性及陽(yáng)性樣本進(jìn)行檢測(cè),結(jié)果顯示特異性和靈敏度均良好。最后,用建立的方法對(duì)人工感染后28d的豬血清和247份臨床樣品進(jìn)行檢測(cè),感染豬血清抗體呈陽(yáng)性,建立的Vlp-ELISA方法、吐溫20膜蛋白-ELISA方法對(duì)不同豬群臨床樣品檢測(cè)的陽(yáng)性率趨勢(shì)相同。綜上所述,建立的Vlp-ELISA方法特異性、穩(wěn)定性良好,可以廣泛用于臨床豬鼻支原體血清抗體檢測(cè),為該病的檢測(cè)和防控提供了重要工具。
[Abstract]:Mycoplasma suis is a common bacteria in pigs, which can cause polyserositis, pneumonia, arthritis, pericarditis and other inflammation in pigs. At present, there is no specific serological diagnostic method. In order to establish a specific ELISA detection method for mycoplasma suis, the specific peptide fragment of variable lipoprotein Vlp on the surface of Mycoplasma suis was used as the coating antigen. The detection conditions of this method are optimized. The final results showed that the best coating concentration of the antigen was 0.312 5 渭 g 路mL ~ (-1), the best dilution of the first antibody was 1: 100 and the action time was 30 min, the best dilution concentration of the second antibody was 1:20 000, the optimum time of action was 30 min, the color reaction time was 10 min, and the judging value of the yin-yang character was 0.27. The results of forkness test showed that there was no cross reaction between VLP antigen and other mycoplasma positive sera and the positive sera of common infectious diseases in pigs. The coefficient of variation within and between batches is lower than 10, which proves that the reproducibility is good. Using the established method to detect known negative and positive samples, the results show that the specificity and sensitivity are good. The established method was used to detect porcine serum and 247 clinical samples after 28 days of artificial infection. The antibody was positive in infected pig serum. The Vlp-ELISA method was established. The Tween-20 membrane protein Elisa method showed the same positive rate in clinical samples from different pig populations. In conclusion, the established Vlp-ELISA method was specific and stable, and could be widely used in clinical detection of mycoplasma mycoplasma antibody. It provides an important tool for the detection, prevention and control of the disease.
【作者單位】： 江蘇省農(nóng)業(yè)科學(xué)院獸醫(yī)研究所·農(nóng)業(yè)部獸用生物制品工程技術(shù)重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室;省部共建國(guó)家重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室培育基地-江蘇省食品質(zhì)量安全重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室;
【基金】：國(guó)家重點(diǎn)研發(fā)計(jì)劃(2016YFD0500702)
【分類號(hào)】：S858.28

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