Rybp基因?qū)η卮ㄅ３杉〖毎只饔玫难芯?/H1>
發(fā)布時間：2018-03-03 21:34
本文選題：牛 切入點：Rybp基因 出處：《西北農(nóng)林科技大學》2017年碩士論文 論文類型：學位論文
【摘要】：隨著人們生活水平不斷提高,牛肉作為一種高蛋白低膽固醇的健康食品越來越受到人們的青睞,市場牛肉的需求量越來越大,供給不足,牛肉價格持續(xù)上漲。如何提高牛肉產(chǎn)量和改善牛肉品質(zhì)成為廣大育種工作者關(guān)注的熱點,而對肉牛肌肉組織生長發(fā)育調(diào)控機制的研究將從分子水平揭示影響肉牛產(chǎn)肉性能和牛肉品質(zhì)形成的機理,為肉牛的分子育種工作奠定基礎(chǔ)。Ring和YY1結(jié)合蛋白(Ring and YY1 binding protein,Rybp)已在小鼠上被證實對肌生成具有抑制作用,而在牛上還未見相關(guān)報道,仍需要進一步研究。本研究以Rybp基因為目標基因,利用實時定量PCR技術(shù),檢測了該基因在秦川牛16種組織、5個不同發(fā)育階段肌肉、脂肪組織以及不同分化階段牛成肌細胞中表達水平,利用腺病毒介導該基因在成肌細胞中過量表達,探究Rybp基因?qū)ε３杉〖毎只淖饔?通過轉(zhuǎn)錄組測序,篩選和鑒定過量表達Rybp基因后的差異表達基因,初步揭示了Rybp基因在牛成肌細胞分化過程中的功能及其對一些重要的成肌細胞分化相關(guān)基因的影響。獲得的主要研究結(jié)果如下:1.秦川牛Rybp基因表達特性分析結(jié)果表明,Rybp基因在成年秦川牛睪丸組織中表達量最高,而在背最長肌、里脊、心臟等組織中的表達量相對較低;隨著秦川牛年齡的增加,Rybp基因在肌肉組織中的表達水平逐漸升高,在脂肪組織中的表達水平顯著下降;在不同分化階段成肌細胞中,隨著成肌細胞分化進程的推進,Rybp基因表達水平逐漸升高,而當分化減速后,Rybp基因表達水平逐漸降低。2.克隆得到秦川牛Rybp基因的CDS區(qū)序列,其長度為687bp,編碼229個氨基酸殘基,然后成功構(gòu)建并獲得了高滴度牛Rybp基因腺病毒過表達載體,病毒滴度為1×109pfu/mL。3.在牛成肌細胞中過表達Rybp基因,可顯著抑制肌管的形成,這種差異從過表達后2d開始出現(xiàn),到6d達到最顯著。將過表達Rybp基因6d后的成肌細胞與對照組細胞進行轉(zhuǎn)錄組測序,結(jié)果共篩選出1311個差異表達基因,其中有707個基因表達水平上調(diào),604個基因表達水平下調(diào),許多參與肌肉發(fā)育相關(guān)的功能基因表達水平均下調(diào),且差異表達基因顯著富集到32條信號通路,包括Wnt等與肌肉發(fā)育相關(guān)通路。
[Abstract]:With the improvement of people's living standard, beef, as a kind of healthy food with high protein and low cholesterol, is getting more and more popular. Beef prices continue to rise. How to increase beef production and improve beef quality has become the focus of attention of the majority of breeders. The study on the mechanism of the growth and development of beef muscle will reveal the mechanism that affects the performance of beef and the formation of beef quality at the molecular level. To lay the foundation for the molecular breeding of beef cattle. Ring and YY1 binding protein Ring and YY1 binding protein Rybp have been proved to inhibit myogenesis in mice, but have not been reported in cattle. In this study, Rybp gene was used as the target gene and real-time quantitative PCR technique was used to detect the expression of the gene in 16 tissues of Qinchuan cattle and 5 muscles in different developmental stages. The expression levels of adipose tissue and bovine myoblasts at different differentiation stages were investigated by using adenovirus mediated overexpression of the gene in the myoblast, and the effect of Rybp gene on the differentiation of bovine myoblast was investigated by transcriptome sequencing. Screening and identification of differentially expressed genes after overexpression of Rybp gene, The function of Rybp gene in the process of bovine myoblast differentiation and its effect on some important genes related to myoblast differentiation were preliminarily revealed. The main results obtained are as follows: 1. Analysis of the expression characteristics of Rybp gene in Qinchuan cattle. The results showed that the expression of RyBP gene was the highest in the testis of Qinchuan cattle. The expression of RyBP gene in muscle tissues of longissimus dorsi, ridge and heart was relatively low, and the expression level of RyBP gene in muscle tissue increased gradually with the increase of age of Qinchuan cattle, and decreased significantly in adipose tissue. In the myoblasts of different differentiation stages, the expression level of RyBP gene increased with the process of myoblast differentiation, but decreased gradually after the differentiation decelerated. The sequence of CDS region of Rybp gene of Qinchuan cattle was cloned. Its length was 687 BP, encoding 229 amino acid residues, and then the overexpression vector of high titer bovine Rybp gene adenovirus was constructed and obtained. The viral titer was 1 脳 10 9 pfup / mL 路3.The overexpression of Rybp gene in bovine myoblasts could significantly inhibit the formation of myotubes. The difference appeared from the second day after overexpression and reached the most significant at 6 days. After 6 days of overexpression of Rybp gene, 1311 differentially expressed genes were sequenced from myoblasts and control cells. 707 genes were up-regulated and 604 genes were down-regulated. Many functional genes involved in muscle development were down-regulated, and differentially expressed genes were enriched to 32 signal pathways. Including Wnt and other related pathways related to muscle development.
【學位授予單位】：西北農(nóng)林科技大學
【學位級別】：碩士
【學位授予年份】：2017
【分類號】：S823
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，
本文編號：1562780
本文鏈接：http://sikaile.net/yixuelunwen/dongwuyixue/1562780.html
本文選題：牛 切入點：Rybp基因 出處：《西北農(nóng)林科技大學》2017年碩士論文 論文類型：學位論文
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6 孫維斌;秦川牛肉用性狀及八個黃牛品種遺傳關(guān)系的DNA分子標記研究[D];西北農(nóng)林科技大學;2003年
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8 張鶯鶯;中國主要牛種肌肉組織基因表達譜特征比較分析[D];西北農(nóng)林科技大學;2010年
9 張全偉;牦牛全基因組CNV及高原適應(yīng)性候選基因（HO1）的研究[D];甘肅農(nóng)業(yè)大學;2015年
10 張麗;黃牛NPY和HCRTR1基因的克隆表達及其遺傳多樣性研究[D];西北農(nóng)林科技大學;2007年
相關(guān)碩士學位論文 前10條
1 田成山;不同生態(tài)條件秦川牛適應(yīng)性研究[D];西北農(nóng)林科技大學;2012年
2 王梓年;三個中國地方黃牛PNPLA3基因遺傳變異及啟動子活性區(qū)域篩選[D];西北農(nóng)林科技大學;2015年
3 陳煜;秦川牛ELOVL6基因SNP檢測及其與體尺、體重、胴體重性狀的關(guān)聯(lián)性分析[D];西北農(nóng)林科技大學;2015年
4 李娜;秦川牛PSMC3基因的SNP檢測及與體尺、胴體性狀的關(guān)聯(lián)性分析[D];西北農(nóng)林科技大學;2015年
5 呂斌;秦川牛PSMC2基因的SNP及其對體尺和胴體性狀的影響[D];西北農(nóng)林科技大學;2015年
6 梁巍;秦川牛PSMC基因家族遺傳變異、可變剪切及啟動子區(qū)甲基化研究[D];西北農(nóng)林科技大學;2016年
7 閻建宇;中國三個黃牛品種ASB-3基因多態(tài)性及其遺傳效應(yīng)與mRNA表達研究[D];西北農(nóng)林科技大學;2016年
8 奚玉蓮;秦川�；蚪M遺傳變異及其與脊椎數(shù)的關(guān)系研究[D];西北農(nóng)林科技大學;2016年
9 韓玉嬌;秦川牛LCORL基因的多態(tài)性、mRNA表達及啟動子區(qū)甲基化研究[D];西北農(nóng)林科技大學;2016年
10 張曉明;秦川牛能量和蛋白質(zhì)需要量研究[D];四川農(nóng)業(yè)大學;2014年
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