本文選題：內(nèi)彎宮脂線蟲(chóng)　切入點(diǎn)：環(huán)介導(dǎo)等溫?cái)U(kuò)增　出處：《中國(guó)預(yù)防獸醫(yī)學(xué)報(bào)》2017年02期 　論文類型：期刊論文

【摘要】：為建立內(nèi)彎宮脂線蟲(chóng)(H.aduncum)的LAMP-LFD快速檢測(cè)技術(shù),本研究將環(huán)介導(dǎo)等溫?cái)U(kuò)增技術(shù)(LAMP)與橫向流動(dòng)試紙條(LFD)的檢測(cè)方法結(jié)合,以內(nèi)彎宮脂線蟲(chóng)核糖體DNA(r DNA)的內(nèi)轉(zhuǎn)錄間隔區(qū)(ITS)序列為檢測(cè)靶標(biāo),設(shè)計(jì)了3對(duì)特異性引物(其中上游內(nèi)引物由生物素標(biāo)記)進(jìn)行LAMP擴(kuò)增反應(yīng),產(chǎn)物與經(jīng)異硫氰酸熒光素(FITC)標(biāo)記的探針雜交,在LFD上完成結(jié)果顯示。結(jié)果表明,LAMP-LFD方法能夠特異性地檢測(cè)內(nèi)彎宮脂線蟲(chóng),對(duì)簡(jiǎn)單異尖線蟲(chóng)等8種其它常見(jiàn)魚(yú)類寄生蠕蟲(chóng)檢測(cè)呈陰性。對(duì)含有內(nèi)彎宮脂線蟲(chóng)r DNA-ITS2序列的重組質(zhì)粒的檢測(cè)靈敏度為1.4×10~2拷貝/μL,為常規(guī)PCR檢測(cè)方法的100倍;對(duì)內(nèi)彎宮脂線蟲(chóng)第三期幼蟲(chóng),單蟲(chóng)檢測(cè)靈敏度為單條蟲(chóng)體基因組DNA的10-6倍。優(yōu)化后LAMP檢測(cè)時(shí)程僅40 min。對(duì)實(shí)際樣品的檢測(cè)結(jié)果表明,LAMP-LFD方法檢測(cè)內(nèi)彎宮脂線蟲(chóng)與PCR結(jié)合測(cè)序方法獲得的結(jié)果一致。因此,利用LAMP-LFD能夠特異、靈敏、高效地檢測(cè)出內(nèi)彎宮脂線蟲(chóng),具有在該線蟲(chóng)的檢驗(yàn)檢疫中良好的應(yīng)用前景。
[Abstract]:In order to establish a rapid LAMP-LFD detection technique for H. aduncumum, the method of loop mediated isothermal amplification (Lamp) and lateral flow test strip (LFDs) was combined in this study. Three pairs of specific primers (including upstream primers labeled by biotin) were designed to detect the internal transcriptional spacer (DNA(r) sequence of nematodes. The product was hybridized with a probe labeled with fluorescein isothiocyanate (FITC). The results on LFD showed that the LAMP-LFD method could specifically detect the nematode. The detection sensitivity of the recombinant plasmid containing r DNA-ITS2 sequence was 1.4 脳 10 ~ 2 copies / 渭 L, which was 100 times higher than that of the conventional PCR method. The third stage larva of Dioscorea innervalis, The detection sensitivity of single worm was 10-6 times as high as that of genomic DNA of single worm. The detection time course of optimized LAMP was only 40 mins. The detection results of real samples showed that the results obtained by LAMP-LFD method were consistent with those obtained by PCR binding sequencing. LAMP-LFD can be used to detect the nematodes specifically, sensitively and efficiently, and has a good application prospect in the inspection and quarantine of the nematode.
【作者單位】： 寧波大學(xué)生物技術(shù)系;舟山出入境檢驗(yàn)檢疫局;
【基金】：國(guó)家高技術(shù)研究發(fā)展計(jì)劃(863計(jì)劃)(2012AA020101) 浙江省自然科學(xué)基金項(xiàng)目(LY14C180002) 浙江省科技計(jì)劃項(xiàng)目(2012C32016) 寧波市科技創(chuàng)新團(tuán)隊(duì)項(xiàng)目(2015C110018) 寧波市科技富民項(xiàng)目(2016C10042)
【分類號(hào)】：S852.7

【參考文獻(xiàn)】

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【共引文獻(xiàn)】

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【二級(jí)參考文獻(xiàn)】

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【相似文獻(xiàn)】

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本文編號(hào)：1559581