本文關(guān)鍵詞： miR--基因簇 ZFPM 雞前脂肪細(xì)胞 細(xì)胞增殖　出處：《遺傳》2017年04期 　論文類型：期刊論文

【摘要】：miR-17-92基因簇在哺乳動(dòng)物的許多生理和病理過程中發(fā)揮重要作用。本實(shí)驗(yàn)室前期研究發(fā)現(xiàn),miR-17-92基因簇促進(jìn)雞前脂肪細(xì)胞的增殖,但其作用機(jī)制尚不清楚。為了揭示miR-17-92基因簇促進(jìn)雞前脂肪細(xì)胞增殖的作用機(jī)制,本研究采用CCK-8細(xì)胞增殖檢測(cè)方法分析干擾ZFPM2對(duì)前脂肪細(xì)胞的影響,結(jié)果發(fā)現(xiàn),干擾ZFPM2能顯著促進(jìn)雞前脂肪細(xì)胞的增殖(P0.01);與CCK-8分析結(jié)果相一致,干擾ZFPM2可致使細(xì)胞增殖標(biāo)志基因PCNA、Ki67、Cyclin D1的mRNA表達(dá)量明顯升高(P0.01或P0.05)。進(jìn)一步對(duì)雞ZFPM2基因進(jìn)行生物信息學(xué)分析,發(fā)現(xiàn)該基因mRNA的3′UTR有兩個(gè)區(qū)域存在miR-17-92基因簇4個(gè)成員(miR-17-5p、miR-20a、miR-19a及miR-19b)的潛在結(jié)合位點(diǎn)。為驗(yàn)證miR-17-92基因簇是否靶作用于雞ZFPM2基因,構(gòu)建了雞ZFPM2基因3′UTR區(qū)的熒光素酶報(bào)告基因載體(野生型)(psi-CHECK2-ZFPM2-3′UTR-WT)及其突變型的熒光素酶報(bào)告基因載體(psi-CHECK2-ZFPM2-3′UTR-MUT)。報(bào)告基因活性分析顯示,過表達(dá)mi-17-92基因簇能極顯著地抑制野生型ZFPM2的報(bào)告基因活性(P0.01);轉(zhuǎn)染miR-17-5p、miR-20a及miR-19a的抑制劑均能顯著地提高野生型ZFPM2報(bào)告基因的活性(P0.01或P0.05),但這些抑制劑對(duì)突變型ZFPM2報(bào)告基因的活性無(wú)明顯影響。q RT-PCR分析發(fā)現(xiàn),miR-17-5p、miR-19a及miR-20a的抑制劑能顯著提高內(nèi)源性ZFPM2基因mRNA的表達(dá)水平(P0.01或P0.05)。共轉(zhuǎn)染分析發(fā)現(xiàn),盡管差異不顯著,但miR-17-5p和miR-19a的抑制劑均傾向于降低ZFPM2干擾片段的促細(xì)胞增殖作用。本研究結(jié)果表明:miR-17-92基因簇成員miR-17-5p、miR-20a、miR-19a及miR-19b靶作用于ZFPM2;miR-17-92基因簇至少部分通過抑制ZFPM2基因表達(dá)從而促進(jìn)雞前脂肪細(xì)胞的增殖。
[Abstract]:MiR-17-92 gene cluster plays an important role in many physiological and pathological processes in mammals. In order to reveal the mechanism of miR-17-92 gene cluster promoting the proliferation of preadipocytes, CCK-8 cell proliferation assay was used to analyze the effect of interfering ZFPM2 on preadipocytes. Interfering with ZFPM2 could significantly promote the proliferation of preadipocytes, and in accordance with the results of CCK-8 analysis, interfering with ZFPM2 could significantly increase the expression of mRNA in the cell proliferation marker gene PCNA1Ki67, Cyclin D1. Further, the bioinformatics analysis of chicken ZFPM2 gene was carried out. It was found that there were two potential binding sites in miR-17-92 gene cluster 4 members of miR-17-92 gene cluster, miR-17-5, miR-20aanmiR-19a and miR-19b, in order to verify whether the miR-17-92 gene cluster was targeted to chicken ZFPM2 gene. The luciferase reporter gene vector psi-CHECK2-ZFPM2-3 UTR-WT) and its mutant luciferase reporter gene vector, psi-CHECK2-ZFPM2-3UUTR-MUTN, were constructed. Overexpression of mi-17-92 gene cluster could significantly inhibit the activity of wild type ZFPM2 reporter gene (P0.01), and transfection of miR-17-5 pnmiR-20a and miR-19a could significantly increase the activity of wild type ZFPM2 reporter gene (P0.01 or P0.05N), but these inhibitors could significantly increase the activity of mutant ZFPM2 reporter gene. There was no significant effect on activity. Q RT-PCR analysis showed that miR-17-5 pmmiR-19a and inhibitor of miR-20a could significantly increase the expression level of mRNA of endogenous ZFPM2 gene (P0.01 or P0.05A). Although the difference is not significant, However, both the inhibitors of miR-17-5p and miR-19a tended to reduce the proliferation of ZFPM2 interference fragments. The results showed that the miR-17-5pmiR-20aanmiR-19a and miR-19b targeted the ZFPM2 miR-17-92 gene cluster to promote the expression of ZFPM2 gene, at least partly by inhibiting the expression of ZFPM2 gene. Proliferation of preadipocytes.
【作者單位】： 農(nóng)業(yè)部雞遺傳育種重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室;黑龍江省普通高等學(xué)校動(dòng)物遺傳育種與繁殖重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室;東北農(nóng)業(yè)大學(xué)動(dòng)物科學(xué)技術(shù)學(xué)院;
【基金】：國(guó)家自然科學(xué)基金項(xiàng)目(編號(hào):31372299) 農(nóng)業(yè)部產(chǎn)業(yè)體系(編號(hào):CARS-42)資助~~
【分類號(hào)】：S831

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本文編號(hào)：1548609