發(fā)布時(shí)間：2018-02-23 22:10

  本文關(guān)鍵詞： 口蹄疫病毒 VP蛋白 Ⅰ型干擾素 IRF　出處：《微生物學(xué)報(bào)》2017年07期 　論文類型：期刊論文

【摘要】：【目的】研究口蹄疫病毒(FMDV)結(jié)構(gòu)蛋白VP0對(duì)Ⅰ型干擾素信號(hào)通路的影響。【方法】通過(guò)反轉(zhuǎn)錄PCR構(gòu)建VP0真核表達(dá)載體,利用Western blotting驗(yàn)證VP0蛋白轉(zhuǎn)染HEK-293T細(xì)胞后的表達(dá)情況;Real-time PCR檢測(cè)VP0蛋白對(duì)FMDV在BHK細(xì)胞上復(fù)制的影響,檢測(cè)VP0蛋白對(duì)SeV誘導(dǎo)的干擾素信號(hào)通路分子RIG-I、IRF3、IFN-β及下游刺激基因ISG15、ISG20表達(dá)的影響;雙熒光素酶報(bào)告基因檢測(cè)系統(tǒng)檢測(cè)VP0蛋白對(duì)SeV誘導(dǎo)的IFN-β和NF-κB啟動(dòng)子激活以及對(duì)RIG-I樣受體(RIG-I-like receptors,RLRs)信號(hào)通路分子激活I(lǐng)FN啟動(dòng)子的影響;免疫共沉淀檢測(cè)VP0蛋白與RLRs信號(hào)通路中關(guān)鍵分子的相互作用�！窘Y(jié)果】成功構(gòu)建了p CAGGs-VP0真核表達(dá)載體,可以在HEK-293T細(xì)胞中表達(dá);FMDV感染后的4 6 h,VP0蛋白顯著促進(jìn)FMDV在BHK細(xì)胞上的復(fù)制(P0.01或P0.05);VP0蛋白明顯抑制干擾素下游刺激基因的表達(dá)(P0.01或P0.05)。在雙熒光素酶報(bào)告基因檢測(cè)實(shí)驗(yàn)中,VP0蛋白抑制SeV誘導(dǎo)IFN-β和NF-κB的活化具有劑量依賴性(P0.01),并對(duì)RIG-I、MDA5、VISA、TBK1和IRF3介導(dǎo)的IFN-β產(chǎn)生具有抑制作用,但是對(duì)IRF7沒(méi)有明顯的影響。免疫共沉淀顯示VP0蛋白可與IRF3發(fā)生相互作用�！窘Y(jié)論】證實(shí)VP0蛋白可以通過(guò)與IRF3相互作用來(lái)抑制Ⅰ型干擾素信號(hào)通路的激活。
[Abstract]:銆愮洰鐨勩，

本文編號(hào)：1527810