發(fā)布時(shí)間：2018-02-15 06:58

  本文關(guān)鍵詞： PRRSV N蛋白 磷酸化 轉(zhuǎn)錄調(diào)控　出處：《中國預(yù)防獸醫(yī)學(xué)報(bào)》2017年07期 　論文類型：期刊論文

【摘要】：為了探索豬繁殖與呼吸綜合征病毒(PRRSV)N蛋白磷酸化對(duì)于病毒復(fù)制和轉(zhuǎn)錄的影響,本研究利用Phos-tag和點(diǎn)突變技術(shù)實(shí)現(xiàn)了N蛋白磷酸化形式的分離并鑒定出磷酸化位點(diǎn)為第120位絲氨酸(Ser120)。通過反向遺傳操作系統(tǒng)將N蛋白的磷酸化位點(diǎn)突變并拯救出病毒�？瞻邔�(shí)驗(yàn)、IFA檢測、病毒生長曲線結(jié)果顯示,磷酸化位點(diǎn)突變對(duì)于病毒的感染性和N蛋白的核定位沒有影響,但是病毒的復(fù)制能力減弱。進(jìn)一步利用熒光定量RT-PCR方法檢測突變病毒與親本病毒在不同感染時(shí)間的基因組RNA和亞基因組RNA的轉(zhuǎn)錄水平,結(jié)果表明突變病毒的g RNA和長鏈sg RNAs轉(zhuǎn)錄水平明顯低于親本病毒,表明N蛋白Ser120磷酸化可能參與了病毒的轉(zhuǎn)錄調(diào)控過程。
[Abstract]:To investigate the effect of phosphorylation of PRRSVN protein on replication and transcription of porcine reproductive and respiratory syndrome virus. In this study, Phos-tag and point mutation techniques were used to isolate the phosphorylation of N protein and identify the phosphorylation site as serine serine serine Ser120. The phosphorylation site of N protein was mutated and the disease was saved by reverse genetic operating system. Virulence. Plaque test, IFA detection, The results of the virus growth curve showed that the phosphorylation site mutation had no effect on the infection of the virus and the nuclear localization of the N protein. However, the replication ability of the virus was weakened. The transcription levels of genomic RNA and subgenomic RNA of mutant virus and parent virus at different infection times were further detected by fluorescence quantitative RT-PCR. The results showed that the transcriptional levels of g RNA and long chain sg RNAs of mutant viruses were significantly lower than those of parental viruses, suggesting that the phosphorylation of N protein Ser120 might be involved in the transcriptional regulation of the virus.
【作者單位】： 中國農(nóng)業(yè)科學(xué)院上海獸醫(yī)研究所;
【基金】：國家科技支撐項(xiàng)目(2015BAD12B01-1) 國家自然科學(xué)基金項(xiàng)目(31502072、31302098、31300140)
【分類號(hào)】：S852.651

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本文編號(hào)：1512691