本文關(guān)鍵詞： 流感病毒 HN亞型 間接ELISA 血凝素蛋白 跨膜區(qū)　出處：《微生物學(xué)通報(bào)》2017年12期 　論文類型：期刊論文

【摘要】：【目的】由于H7N9禽流感病毒能夠感染雞,并且已經(jīng)變異成了高致病性毒株,因此,雞群中H7N9禽流感疫苗的免疫是一個趨勢,而雞群免疫后抗體檢測方法的建立也十分必要。本研究旨在建立一種靈敏、高效、高通量的雞群H7N9亞型禽流感病毒抗體間接酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)(ELISA)檢測方法。【方法】通過昆蟲桿狀病毒表達(dá)系統(tǒng)分別表達(dá)屬于W1、W2-A和W2-B分支H7N9流感病毒的3種野生型血凝素(HA)蛋白,以及跨膜區(qū)(TM)置換為H3 HA TM的W2-B分支HA蛋白(H7-53TM)。4種HA蛋白經(jīng)過離子交換層析純化后作為抗原,通過ELISA檢測H7N9禽流感病毒抗體�！窘Y(jié)果】ELISA特異性、敏感性和重復(fù)性試驗(yàn)結(jié)果顯示,跨膜區(qū)置換主要影響HA蛋白ELISA檢測的重復(fù)性,以H7-53TM為抗原的ELISA方法具有較好的重復(fù)性,其批內(nèi)和批間變異系數(shù)小于10%,然而3種野生型HA蛋白與部分血清反應(yīng)批內(nèi)和批間變異系數(shù)大于10%,重復(fù)性較差,因此選擇H7-53TM蛋白作為ELISA包被抗原。通過受試者工作特征曲線(ROC曲線)分析,以H7-53TM為抗原的ELISA能夠精準(zhǔn)地區(qū)分H7N9亞型流感病毒抗體陽性和陰性血清。通過相關(guān)性分析,該ELISA方法與134份雞血清HI試驗(yàn)結(jié)果具有顯著強(qiáng)相關(guān)性(r=0.854 6,P0.000 1),并且與3個分支疫苗株免疫血清的HI試驗(yàn)結(jié)果也具有顯著相關(guān)性(r0.5,P0.05)。【結(jié)論】跨膜區(qū)置換能夠提高HA蛋白抗原檢測H7N9禽流感病毒抗體的重復(fù)性,并應(yīng)用跨膜區(qū)置換的HA蛋白建立了一種能夠檢測不同分支疫苗株免疫的H7N9亞型禽流感病毒抗體間接ELISA檢測方法。
[Abstract]:[objective] since H7N9 avian influenza virus can infect chickens and has mutated into highly pathogenic strain, immunization of H7N9 avian influenza vaccine in chickens is a trend. It is also necessary to establish a method for the detection of antibodies in chickens after immunization. The purpose of this study was to establish a sensitive and efficient method for the detection of antibodies in chickens. High throughput Elisa was used to detect H7N9 subtype avian influenza virus antibody in chickens. [methods] three wild type hemagglutinin (HAA) proteins belonging to W1W2-A and W2-B branch H7N9 influenza virus were expressed by baculovirus expression system. The HA protein H7-53TM.4 was purified by ion exchange chromatography and used as antigen to detect H7N9 avian influenza virus antibody by ELISA. [results] the specificity, sensitivity and reproducibility of H7N9 avian influenza virus were detected by ELISA specificity, sensitivity and reproducibility test. Transmembrane region replacement mainly affected the reproducibility of ELISA detection of HA protein. The ELISA method with H7-53TM as antigen had good reproducibility. The coefficient of variation within and between batches was less than 10, however, the coefficient of variation between the three wild type HA proteins and partial serum was greater than 10, and the repeatability was poor. Therefore, H7-53TM protein was selected as ELISA coated antigen. By using the operating characteristic curve of the subjects, ELISA with H7-53TM as antigen could accurately distinguish positive and negative sera against H7N9 subtype influenza virus. The ELISA method has a significant correlation with the HI test results of 134 chicken serum samples, and also with the HI test results of three branch vaccine strains. [conclusion] Transmembrane region replacement can improve HA protein. The reproducibility of detection of H7N9 avian influenza virus antibody by antigens, An indirect ELISA detection method of H7N9 subtype avian influenza virus antibody was established by using the HA protein transmembrane region to detect the immune response of different branch vaccine strains to Avian Influenza virus (Avian Influenza virus).
【作者單位】： 中山大學(xué)生命科學(xué)學(xué)院有害生物控制與資源利用國家重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室;
【基金】：廣州市科技計(jì)劃項(xiàng)目(No.201504010025) 廣東省農(nóng)業(yè)廳H7N9流感聯(lián)合攻關(guān)項(xiàng)目(粵財(cái)農(nóng)[2014]380號)~~
【分類號】：S858.31

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