本文關(guān)鍵詞： 豬繁殖與呼吸綜合征病毒 基因組分子特征 GP5 中和抗體　出處：《廣西大學(xué)》2015年碩士論文　論文類型：學(xué)位論文

【摘要】：PRRS是流行最廣的接觸性傳染病,給全世界的養(yǎng)豬業(yè)帶來巨大的經(jīng)濟(jì)損失。特別是2006年以來,HP-PRRSV肆虐中國養(yǎng)豬業(yè),給中國的養(yǎng)豬業(yè)帶來巨大的創(chuàng)傷。廣西是養(yǎng)豬大省,PRRSV是影響?zhàn)B豬業(yè)的主要病原之一,對(duì)PRRSV的防控至關(guān)重要。(1)為了了解廣西PRRSV流行趨勢(shì)、基因遺傳變異規(guī)律,為該病的防控提供理論依據(jù)。本研究通過RT-PCR方法對(duì)2013-2014年采集的廣西地區(qū)各地市疑似PRRSV感染的475份樣品進(jìn)行病原檢測(cè),陽性率為27.2%,說明廣西存在PRRSV流行；對(duì)檢測(cè)為PRRSV陽性的樣品在MARC-145細(xì)胞上進(jìn)行病毒的分離鑒定,共分離獲得廣西PRRSV流行毒株65株。通過RT-PCR方法擴(kuò)增、測(cè)序31株流行毒株的NSP2基因的高變區(qū)和58株流行毒株ORF5基因序列。31株P(guān)RRSV NSP2基因高變區(qū)序列核苷酸同源性為73.4-100%,推導(dǎo)編碼的氨基酸同源性為83.1～100%,與NCBI部分參考毒株的相應(yīng)核苷酸序列同源性為41.4～99.5%,推導(dǎo)編碼氨基酸同源性為28.4-99.2%,NSP2普遍存在1+29個(gè)氨基酸缺失,缺失位置與高致病性毒株JXA1一致,GXYL1403d毒株的NSP2存在124個(gè)氨基酸缺失；NSP2基因高變區(qū)核苷酸遺傳進(jìn)化分析表明31株P(guān)RRSV均與HP-PRRSV分布于同一分支上,表明31株P(guān)RRSV均為HP-PRRSV。58株流行毒株ORF5基因核苷酸之間同源性為86.4～100%,推導(dǎo)編碼的氨基酸同源性為84.5～100%,與NCBI部分參考毒株的相應(yīng)核苷酸序列同源性為62.9～100%,推導(dǎo)編碼氨基酸同源性為56.6～100%,ORF5基因核苷酸遺傳進(jìn)化分析表明58株P(guān)RRSV中,GXYL1403a和GXLB1403這兩株毒株與經(jīng)典毒株VR-2332分布于同一分支,GXGG1305a、GXGG1305b、GXGG1306與中間型毒株Em2007、HB-1/2(sh)-2002等分布于同一分支,其他的53株與HP-PRRSV分布于同一分支。序列分析和遺傳進(jìn)化分析結(jié)果說明了廣西流行多為高致病性PRRSV亞型毒株,但是經(jīng)典型和中間過渡型毒株仍有少量流行。(2)對(duì)NSP2和GP5序列分析有特征性的4個(gè)毒株(GXYL1403d、 GXGG 1305a、GXGG1305b和GXGG 1306)進(jìn)行全基因測(cè)定、序列比較和遺傳進(jìn)化。結(jié)果表明,GXGG1305a、GXGG1305、GXGG1306這3株病毒全基因?yàn)?5300 nt, GXYL1403d為15018 nt,4株病毒全基因組核苷酸同源性為96.3～99.6%,與參考序列的同源性為60.7～98.1%。NSP2基因氨基酸序列比對(duì)結(jié)果表明GXYL1403d分別在481和511～635位缺失1個(gè)和123個(gè)氨基酸,這個(gè)位置的缺失是從未報(bào)道過的；GXGG1305a、GXGG1305b、 GXGG1306缺失1+29個(gè)氨基酸,缺失位置與高致病性毒株JXA1一致。變異最大的GP5和GP3氨基酸比對(duì)結(jié)果表明,GXGG1305a、GXGG1305b、 GXGG1306這三株病毒與JXA1相比,存在多個(gè)氨基酸位點(diǎn)的突變�；谌L序列進(jìn)行遺傳進(jìn)化分析發(fā)現(xiàn)GXYL1403d分布于HP-PRRSV分支,GXGG1305a、GXGG1305b、GXGG1306分布于中間型。以上這些結(jié)果說明了中間型毒株與JXA1和CH-1a相比存在多處氨基酸位點(diǎn)突變。(3)為研究分離的PRRSV毒株對(duì)高免血清的易感性、GP5氨基酸變異與中和抗體滴度差異相關(guān)性。本研究用抗JXM100毒株的免疫血清對(duì)2013-2014年廣西30株P(guān)RRSV分離株和1株疫苗株進(jìn)行中和抗體滴度差異性試驗(yàn)。結(jié)果表明2013-2014年廣西的PRRSV流行株的中和抗體滴度高低不一,31株P(guān)RRSVs根據(jù)中和抗體滴度差異分為3個(gè)型,即敏感型(1：16≤VN titers1:64之間)、中等抵抗型(1:16VN titers≤1:8)和完全抵抗型(VN titers1:8)。通過分析GP5氨基酸序列與中和抗體滴度差異性結(jié)果表明：GP5氨基酸同源性的高低與中和抗體滴度高低不存在直接的相關(guān)性。進(jìn)一步比較GP5序列發(fā)現(xiàn),敏感型、中等抵抗型毒株和完全抵抗型毒株的32-34aa變異較大；而在57-59aa位點(diǎn),完全抵抗型毒株的GXLB1403、GXYL1403a出現(xiàn)Ω58→N58的變異。另外,GXLB1403、GXYL1403a存在S137→A137和R151→T151的變異。中和抗體表位B的分析也發(fā)現(xiàn)完全抵抗型毒株GXLB1403、GXYL1403a表位B出現(xiàn)了I39→L39變異。這些位點(diǎn)的變化,可能是導(dǎo)致不同毒株對(duì)中和抗體滴度差異根本原因。
[Abstract]:In order to understand the epidemic trend and gene genetic variation in Guangxi , it is very important to detect the epidemic trend and gene genetic variation in Guangxi . The results showed that there were more than 1 and 123 amino acids in the whole genome . The results showed that there were more than 1 and 123 amino acids in the whole genome . The results showed that there were more than 1 and 123 amino acids in the whole genome of the isolates . The results showed that the results showed that there were more than 1 and 123 amino acids in the total genomic nucleotide sequence . The results showed that there was no direct correlation between the amino acid sequence of GP5 and the titer of neutralizing antibody . The results showed that there was no direct correlation between the amino acid sequence of GP5 and the titer of neutralizing antibody .

【學(xué)位授予單位】：廣西大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2015
【分類號(hào)】：S852.65

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本文編號(hào)：1501248