發(fā)布時(shí)間：2018-02-10 02:07

  本文關(guān)鍵詞： 新城疫病毒 樹突狀細(xì)胞 樹突狀細(xì)胞特異性粘附分子-3-結(jié)合非整合素分子 巨胞飲 淋巴細(xì)胞增殖　出處：《西北農(nóng)林科技大學(xué)》2015年碩士論文　論文類型：學(xué)位論文

【摘要】：新城疫(Newcastle Disease,ND)是由新城疫病毒(Newcastle Diseases Virus,NDV)引起的一種熱性、急性的禽類傳染病。作為目前在世界范圍內(nèi)廣泛流行的嚴(yán)重的禽類傳染病,因其巨大的危害性,給養(yǎng)殖業(yè)造成了巨大的損失。對(duì)該病的預(yù)防主要以接種疫苗為主,但因?yàn)镹D的基因型等的差異性和多樣性,加之ND在免疫抑制方面的作用,使傳統(tǒng)的疫苗難以起到對(duì)其高效安全的保護(hù)效果。樹突狀細(xì)胞(Dendritic cells,DC)是已知的功能最強(qiáng)的抗原提呈細(xì)胞(antigen presenting cell,APC)。可以通過(guò)巨胞飲、吞噬和受體介導(dǎo)的內(nèi)吞等方式提呈抗原。DCs作為連接天然免疫和獲得性免疫的橋梁,能夠?qū)Σ≡l(fā)揮調(diào)節(jié)作用。一些病毒可以通過(guò)感染DCs起到逃避機(jī)體免疫監(jiān)視,促進(jìn)感染等作用。樹突狀細(xì)胞特異性粘附分子-3-結(jié)合非整合素分子(DC specific intercellular-adhesion-molecule-3 grabbing nonintegrin,DC-SIGN)是DCs表面的C型凝集素受體,屬于Ⅱ型跨膜蛋白,參與DCs對(duì)病原體的識(shí)別與攝入,在DCs的黏附,遷移,炎癥反應(yīng),激活初級(jí)T細(xì)胞,觸發(fā)免疫反應(yīng)等環(huán)節(jié)都需要DC-SIGN的參與。本研究對(duì)DC-SIGN在NDV感染DCs時(shí)對(duì)T淋巴細(xì)胞增殖的影響及NDV進(jìn)入DCs的主要途徑,開展了以下三部分研究。第一部分,檢測(cè)NDV強(qiáng)毒株Herts/33和弱毒株NDV-GFP(La Sota骨架)感染DCs后,能夠刺激DCs成熟,且DCs表面共刺激分子及細(xì)胞因子表達(dá)發(fā)生變化,發(fā)揮免疫調(diào)節(jié)的功能。能有效激活T淋巴細(xì)胞,啟動(dòng)初始免疫應(yīng)答。第二部分,利用Transwell試驗(yàn)檢測(cè)了DCs在NDV刺激CD4+T淋巴細(xì)胞增殖中的作用,表明NDV活病毒抑制T細(xì)胞增殖需要依賴DCs和T細(xì)胞相互接觸。流式細(xì)胞術(shù)和Western blot試驗(yàn)證實(shí)DC-SIGN抗體對(duì)NDV感染DCs影響T細(xì)胞增殖的作用,顯示DC-SIGN在NDV感染DCs與T細(xì)胞時(shí)發(fā)揮抑制作用。流式細(xì)胞術(shù)檢測(cè)細(xì)胞巨胞飲抑制劑Rottlerin在NDV感染DCs中發(fā)揮的作用,說(shuō)明NDV感染DCs可能主要通過(guò)巨胞飲的途徑完成。第三部分,構(gòu)建了DC-SIGN穩(wěn)定表達(dá)細(xì)胞系。真核表達(dá)載體pcDNA3.1中連入DC-SIGN基因,轉(zhuǎn)染HeLa細(xì)胞,經(jīng)G418篩選獲得了穩(wěn)定表達(dá)DC-SIGN蛋白的細(xì)胞系。經(jīng)PCR,Western blot方法驗(yàn)證,該細(xì)胞系能夠正確并且穩(wěn)定表達(dá)DC-SIGN蛋白,反復(fù)凍存和復(fù)蘇以及連續(xù)傳代培養(yǎng)數(shù)代后的細(xì)胞仍然能夠穩(wěn)定表達(dá)DC-SIGN蛋白,說(shuō)明細(xì)胞系構(gòu)建成功,這為后續(xù)研究NDV病毒蛋白與DC-SIGN蛋白的相互作用奠定了基礎(chǔ)。
[Abstract]:Newcastle disease (NDV) is a kind of feverish, acute avian infectious disease caused by Newcastle Diseases virus (NDV). The prevention of the disease is mainly vaccination, but because of the difference and diversity of ND genotypes, plus the role of ND in immunosuppression, Dendritic cells (DC) are the most potent antigen presenting cells known to be the most potent antigen presenting cells (APC). Phagocytosis and receptor-mediated endocytosis present antigens. DCs act as a bridge between innate and acquired immunity and regulate pathogens. Some viruses can evade immune surveillance by infecting DCs. DC specific intercellular-adhesion-molecule-3 grabbing nonintegrin DC-SIGN is a C-type lectin receptor on the surface of DCs, belonging to type 鈪，

本文編號(hào)：1499405