本文關(guān)鍵詞： 禽呼腸孤病毒 σA基因 酵母雙雜交 誘餌載體　出處：《中國畜牧獸醫(yī)》2017年03期 　論文類型：期刊論文

【摘要】：為了篩選與禽呼孤病毒σA基因相互作用的宿主蛋白,本試驗應(yīng)用酵母雙雜交技術(shù)構(gòu)建禽呼孤病毒σA基因的誘餌載體pGBKT7-σA。從禽呼腸孤病毒S1133標(biāo)準(zhǔn)毒株抽提RNA,采用RT-PCR方法擴(kuò)增得到σA基因片段,將其連接到誘餌載體pGBKT7上,把通過測序的重組誘餌載體命名為pGBKT7-σA。將重組誘餌載體轉(zhuǎn)化釀酒酵母Y2HGold后,把不同濃度的誘餌載體轉(zhuǎn)化液涂布在營養(yǎng)缺陷型培養(yǎng)基上,觀察該重組誘餌載體在酵母細(xì)胞中有無毒性作用和自激活現(xiàn)象。結(jié)果顯示,酵母雙雜交誘餌載體pGBKT7-σA構(gòu)建成功,且對釀酒酵母無毒性和自激活現(xiàn)象。本研究為進(jìn)一步利用酵母雙雜交技術(shù)篩選與σA蛋白互作的宿主蛋白奠定了基礎(chǔ)。
[Abstract]:In order to screen host proteins interacting with 蟽 A gene of avian reovirus. The bait vector pGBKT7- 蟽 A of avian reovirus 蟽 A gene was constructed by yeast two-hybrid technique. RNA was extracted from the standard strain of avian reovirus S1133. The 蟽 A gene fragment was amplified by RT-PCR and ligated to the decoy vector pGBKT7. The recombinant bait vector was named pGBKT7- 蟽 A. the recombinant bait vector was transformed into Saccharomyces cerevisiae Y2HGold. The transformation solution of different concentration of bait carrier was coated on nutrition-deficient medium to observe the non-toxicity and self-activation of the recombinant bait vector in yeast cells. The results showed that the recombinant bait vector had no toxicity and self-activation. Yeast two-hybrid bait vector pGBKT7- 蟽 A was successfully constructed. This study laid a foundation for the further screening of host proteins interacting with 蟽 A protein by yeast two-hybrid technique in the absence of toxicity and self-activation of Saccharomyces cerevisiae (Saccharomyces cerevisiae).
【作者單位】： 廣西大學(xué)動物科學(xué)技術(shù)學(xué)院;廣西壯族自治區(qū)獸醫(yī)研究所廣西獸醫(yī)生物技術(shù)重點(diǎn)實(shí)驗室;
【基金】：國家自然科學(xué)基金項目(31660715、31160512) 國家"萬人計劃"領(lǐng)軍人材專項(2016-37) 廣西特聘專家專項(2011B020)
【分類號】：S852.65

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