發(fā)布時(shí)間：2018-02-01 23:19

  本文關(guān)鍵詞： 綿羊 Nanog啟動(dòng)子 載體構(gòu)建 表達(dá)活性分析　出處：《中國(guó)獸醫(yī)學(xué)報(bào)》2017年07期 　論文類(lèi)型：期刊論文

【摘要】：通過(guò)比對(duì)人、鼠、兔和牛的Nanog啟動(dòng)子保守區(qū)設(shè)計(jì)引物,PCR擴(kuò)增綿羊Nanog基因啟動(dòng)子序列并分析其調(diào)控位點(diǎn)。將其連接到去掉自身CMV啟動(dòng)子的pAcGFP1-N1載體上,構(gòu)建一個(gè)由Nanog啟動(dòng)子帶動(dòng)的真核表達(dá)載體(SNanog-pAcGFP1-N1),即構(gòu)建一個(gè)能由該啟動(dòng)子序列帶動(dòng)并產(chǎn)生綠色熒光蛋白(GFP)的真核表達(dá)載體,并用脂質(zhì)體法轉(zhuǎn)染入終末分化細(xì)胞(小鼠成纖維細(xì)胞和綿羊成纖維細(xì)胞)、胚胎干細(xì)胞和小鼠胚胎,檢測(cè)其表達(dá)活性。結(jié)果顯示:成功克隆出1 836bp Nanog啟動(dòng)子序列,通過(guò)分析發(fā)現(xiàn)該序列含有SP1結(jié)合位點(diǎn)、CAAT框、TATA框等功能區(qū);當(dāng)轉(zhuǎn)染SNanog-pAcGFP1-N1重組質(zhì)粒后,小鼠胚胎和小鼠胚胎干細(xì)胞中能檢測(cè)到綠色熒光,且在轉(zhuǎn)染72h后達(dá)到最大熒光強(qiáng)度,而在小鼠成纖維細(xì)胞和綿羊成纖維細(xì)胞中不能觀察到GFP。結(jié)果表明:本試驗(yàn)成功克隆獲得綿羊Nanog啟動(dòng)子,所構(gòu)建的真核表達(dá)載體具有在多能干細(xì)胞中特異性表達(dá)活性。
[Abstract]:Primers were designed by comparing the conserved region of Nanog promoter between human, mouse, rabbit and cow. The promoter sequence of sheep Nanog gene was amplified by PCR and its regulatory site was analyzed. The promoter was ligated to the pAcGFP1-N1 vector that removed its own CMV promoter. A Nanog promoter driven eukaryotic expression vector SNanog-pAcGFP1-N1) was constructed. A eukaryotic expression vector was constructed which was driven by the promoter sequence and produced green fluorescent protein (GFP) and transfected into terminal differentiation cells (mouse fibroblasts and sheep fibroblasts) by liposome method. The expression activity of embryonic stem cells and mouse embryos was detected. The results showed that 1 836 BP Nanog promoter sequence was cloned successfully and the sequence contained SP1 binding site. CAAT frame, Tata box and other functional areas; After transfection of SNanog-pAcGFP1-N1 recombinant plasmid, green fluorescence could be detected in mouse embryo and mouse embryonic stem cells, and the maximum fluorescence intensity was reached 72 hours after transfection. GFP was not observed in mouse fibroblasts and sheep fibroblasts. The results showed that sheep Nanog promoters were cloned successfully in this experiment. The constructed eukaryotic expression vector has specific expression activity in pluripotent stem cells.
【作者單位】： 東北林業(yè)大學(xué)生命科學(xué)學(xué)院;
【基金】：東北林業(yè)大學(xué)大學(xué)生科研訓(xùn)練項(xiàng)目;東北林業(yè)大學(xué)生命科學(xué)學(xué)院大學(xué)生創(chuàng)新資助項(xiàng)目 國(guó)家自然科學(xué)基金資助項(xiàng)目(31000990)
【分類(lèi)號(hào)】：Q78;S826
【正文快照】： *Corresponding author,E-mail:wangchunsheng79@163.comNanog基因最早在小鼠囊胚期的內(nèi)細(xì)胞團(tuán)、胚胎干細(xì)胞以及原始生殖細(xì)胞中發(fā)現(xiàn)[1-2]。該基因編碼的同源異型框蛋白,能繞過(guò)LIF/Stat3通路維持ES細(xì)胞的自我更新能力,在囊胚形成后的第2個(gè)胚胎命運(yùn)的特化中發(fā)揮關(guān)鍵作用。隨后的

【參考文獻(xiàn)】

相關(guān)期刊論文 前2條

1 ;Functional analysis of two Sp1/Sp3 binding sites in murine Nanog gene promoter[J];Cell Research;2006年03期

2 ;Isolation and characterization of the murine Nanog gene promoter[J];Cell Research;2005年05期

【共引文獻(xiàn)】

相關(guān)期刊論文 前8條

1 郭虎;章栩鋮;胡媛繡珠;尚美奇;安鐵洙;王春生;;綿羊Nanog啟動(dòng)子克隆及其表達(dá)活性的檢測(cè)[J];中國(guó)獸醫(yī)學(xué)報(bào);2017年07期

2 So Dam Jin;Bo Ram Lee;Young Sun Hwang;Hong Jo Lee;Jong Seop Rim;Jae Yong Han;;Regulatory elements and transcriptional control of chicken vasa homologue(CVH)promoter in chicken primordial germ cells[J];Journal of Animal Science and Biotechnology;2017年02期

3 袁鵬;岳天華;肖艷華;朱梁軍;李晟;陳寶安;王傳偉;;阿霉素對(duì)不同轉(zhuǎn)移能力肝癌細(xì)胞及肝癌干細(xì)胞相關(guān)基因表達(dá)的影響[J];腫瘤防治研究;2015年12期

4 黃進(jìn)強(qiáng);陳松林;邵長(zhǎng)偉;劉洋;林帆;李亞亞;王娜;;半滑舌鰨vasa調(diào)控區(qū)的克隆、表達(dá)載體構(gòu)建及其驅(qū)動(dòng)活性檢測(cè)[J];中國(guó)水產(chǎn)科學(xué);2015年01期

5 Ding Sun;Lei Qin;Yang Xu;Jian-Xia Liu;Li-Ping Tian;Hai-Xin Qian;;Influence of adriamycin on changes in Nanog, Oct-4, Sox2, ARID1 and Wnt5b expression in liver cancer stem cells[J];World Journal of Gastroenterology;2014年22期

6 齊立杰;郭志坤;李瓊;羅歡歡;;Nanog蛋白在CD73~+小鼠脂肪源間充質(zhì)干細(xì)胞中的表達(dá)[J];解剖學(xué)報(bào);2012年05期

7 李令杰;金穎;;調(diào)控胚胎干細(xì)胞自我更新的關(guān)鍵轉(zhuǎn)錄因子研究進(jìn)展[J];生命科學(xué);2009年05期

8 周珍輝;阮志剛;楊學(xué)義;;Nanog基因的功能與調(diào)控[J];中國(guó)生物工程雜志;2008年08期

【相似文獻(xiàn)】

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1 李珍珍;成德;高yN;王華巖;;共表達(dá)外源OCT4/SOX2可激活人胚腎細(xì)胞中內(nèi)源NANOG的表達(dá)[J];中國(guó)生物化學(xué)與分子生物學(xué)報(bào);2011年09期

2 ;[J];;年期

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1 楊陽(yáng);劉薇;劉兆良;胡曉湘;李寧;;豬nanog基因的克隆及染色體定位[A];全國(guó)首屆動(dòng)物生物技術(shù)學(xué)術(shù)研討會(huì)論文集[C];2004年

相關(guān)博士學(xué)位論文 前2條

1 周海濤;慢病毒介導(dǎo)的Nanog基因?qū)χ車(chē)窠?jīng)損傷性神經(jīng)病理性疼痛模型脊髓突觸重塑的影響[D];福建醫(yī)科大學(xué);2012年

2 陳清江;Nanog在食管癌中的表達(dá)及意義[D];鄭州大學(xué);2011年

相關(guān)碩士學(xué)位論文 前4條

1 劉曉輝;Nanog在胃癌上皮間質(zhì)轉(zhuǎn)化過(guò)程中的作用研究[D];華北理工大學(xué);2016年

2 李強(qiáng);不同生長(zhǎng)方式胃癌組織中Nanog表達(dá)及臨床意義[D];福建醫(yī)科大學(xué);2013年

3 王衛(wèi)生;胚胎干細(xì)胞關(guān)鍵因子Nanog在膀胱癌中的表達(dá)及與腫瘤干細(xì)胞的關(guān)系[D];重慶醫(yī)科大學(xué);2009年

4 侯歌;胃癌組織中PCNA、Ki-67、Nanog、Oct-4的表達(dá)與復(fù)發(fā)轉(zhuǎn)移的關(guān)系[D];鄭州大學(xué);2013年

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本文編號(hào)：1483109