本文關(guān)鍵詞： 藍(lán)舌病 VP蛋白 表達(dá) 免疫反應(yīng)性　出處：《中國畜牧獸醫(yī)》2017年07期 　論文類型：期刊論文

【摘要】：試驗(yàn)旨在研究藍(lán)舌病1型病毒(bluetongue virus serotype 1,BTV-1)VP2蛋白體外表達(dá)產(chǎn)物免疫反應(yīng)性。根據(jù)已發(fā)表的BTV-1Y863毒株L2基因序列設(shè)計合成特異性BTV-1PCR引物,通過RT-PCR方法擴(kuò)增L2基因,將純化的L2基因克隆至pEASY-Blunt E1表達(dá)載體,對重組質(zhì)粒進(jìn)行鑒定,將陽性重組質(zhì)粒L2克隆至大腸桿菌BL21(DE3)感受態(tài)細(xì)胞進(jìn)行表達(dá),對獲得的純化的BTV-1 VP2重組蛋白進(jìn)行Western blotting、ELISA、阻斷ELISA分析。結(jié)果顯示,BTV-1VP2蛋白在pEASY-Blunt E1載體上以包涵體形式表達(dá),通過Ni-NTA親和層析,160和200mmol/L咪唑是洗脫BTV-1VP2蛋白表達(dá)產(chǎn)物的最佳濃度。純化獲得N末端攜帶多聚組氨酸標(biāo)簽的BTV-1VP2重組蛋白,分子質(zhì)量約105ku,Western blotting、ELISA、阻斷ELISA結(jié)果顯示,重組BTV-1VP2蛋白能與BTV-1型特異性抗體發(fā)生特異性結(jié)合,且此結(jié)合能被BTV-1阻斷。本試驗(yàn)結(jié)果表明,通過原核表達(dá)載體pEASY-Blunt E1表達(dá)的BTV-1VP2重組蛋白具有良好的免疫反應(yīng)性,為BTV-1VP2蛋白型特異性表位定位研究奠定了基礎(chǔ)。
[Abstract]:The aim of this study was to study the bluetongue virus serotype 1 of bluetongue type 1 virus. The expression product of BTV-1)VP2 protein was immunoreactive in vitro. Specific BTV-1PCR primers were designed and synthesized according to the published L2 gene sequence of BTV-1Y863 strain. The L2 gene was amplified by RT-PCR, and the purified L2 gene was cloned into pEASY-Blunt E1 expression vector to identify the recombinant plasmid. The positive recombinant plasmid L2 was cloned into Escherichia coli BL21DDE3) and expressed in the competent cells. The purified BTV-1 VP2 recombinant protein was analyzed by Western blotting and ELISA analysis. BTV-1VP2 protein was expressed in the form of inclusion body on pEASY-Blunt E1 vector, and Ni-NTA affinity chromatography was used. 160 and 200 mmol / L imidazole was the best concentration for elution of BTV-1VP2 protein expression product. BTV-1VP2 recombinant protein with polyhistidine label was purified. The molecular weight of EISAs was about 105 Ku. Western blotting showed that EISAs were blocked by ELISA. The recombinant BTV-1VP2 protein can specifically bind to BTV-1 specific antibody, and this binding can be blocked by BTV-1. The recombinant BTV-1VP2 protein expressed by prokaryotic expression vector pEASY-Blunt E1 has good immunoreactivity. The results laid a foundation for the study of BTV-1VP2 type specific epitope localization.
【作者單位】： 云南省熱帶亞熱帶動物病毒病重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室;
【基金】：國家自然科學(xué)基金(31260612) 公益性行業(yè)(農(nóng)業(yè))科研專項(xiàng)(201303035)
【分類號】：S852.65
【正文快照】： 藍(lán)舌病是由藍(lán)舌病病毒(bluetongue virus,BTV)引起的通過庫蠓等媒介昆蟲傳播的反芻動物的蟲媒病毒病[1]。BTV主要引起綿羊發(fā)病和死亡,牛和山羊常為隱性感染,藍(lán)舌病的發(fā)生和分布與媒介昆蟲的分布有密切關(guān)系,主要暴發(fā)于庫蠓大量活動的夏秋季節(jié),特別多見于低洼潮濕多水區(qū)域,該病

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