發(fā)布時(shí)間：2018-01-28 02:16

  本文關(guān)鍵詞： 豬鏈球菌 分支酸合成酶 細(xì)胞因子　出處：《華中農(nóng)業(yè)大學(xué)》2015年碩士論文　論文類型：學(xué)位論文

【摘要】：豬鏈球菌(Streptococcus suis,S.suis)是一種重要的人獸共患病原菌,根據(jù)莢膜多糖可以分為33個(gè)血清型(1-31,33和1/2型),其中豬鏈球菌2型(streptococcus suis serotype 2)分布最廣、危害最嚴(yán)重。豬群感染豬鏈球菌后,通常會(huì)表現(xiàn)出如下癥狀:如關(guān)節(jié)炎、腦膜腦炎、心內(nèi)膜炎、或者敗血癥等。病豬感染豬鏈球菌后其免疫系統(tǒng)會(huì)被激活,有利于病豬抵抗豬鏈球菌的侵襲,但是如果宿主應(yīng)對(duì)侵襲免疫反應(yīng)過(guò)度時(shí)可能會(huì)導(dǎo)致病情進(jìn)一步加深產(chǎn)生敗血性休克。有研究用滅活的豬鏈球菌刺激人或鼠的星形膠質(zhì)細(xì)胞或巨噬細(xì)胞發(fā)現(xiàn)能產(chǎn)生較高的促炎細(xì)胞因子。這些研究也說(shuō)明豬鏈球菌中存在一些促炎性組分,并且這些組分在導(dǎo)致宿主產(chǎn)生敗血癥過(guò)程中發(fā)揮著重要的作用,但是這些組分有待于進(jìn)一步鑒定及驗(yàn)證。本研究驗(yàn)證了豬鏈球菌表面蛋白分支酸合成酶的促炎性作用,并對(duì)其引起炎性反應(yīng)的具體機(jī)制開展進(jìn)一步研究�，F(xiàn)將主要研究報(bào)告如下:1.豬鏈球菌2型分支酸合成酶在小鼠巨噬細(xì)胞RAW264.7上的促炎性研究體外在大腸桿菌中表達(dá)并純化分支酸合成酶,以RAW264.7細(xì)胞為模型研究分支酸合成酶的促炎性。結(jié)果顯示該蛋白能引起RAW264.7細(xì)胞產(chǎn)生較高水平的IL1-β與TNF-α。2.豬鏈球菌2型分支酸合成酶促炎機(jī)制研究研究發(fā)現(xiàn)TLR4的抗體能阻斷分支酸合成酶所引起的促炎性反應(yīng),并且TLR2的抗體不能阻斷這一反應(yīng)。實(shí)驗(yàn)結(jié)果顯示NF-κB和P38參與Aro C刺激RAW264.7后引起的IL-1β的上調(diào);而NF-κB參與Aro C刺激RAW264.7后引起的TNF-α的上調(diào)。3.豬鏈球菌2型aro C基因缺失突變株的構(gòu)建及其生物學(xué)特性分析實(shí)驗(yàn)構(gòu)建了aro C基因缺失的豬鏈球菌突變株,之后對(duì)突變株的生物學(xué)特性進(jìn)行分析,結(jié)果顯示aro C基因缺失與野生菌株SC19的生長(zhǎng)曲線無(wú)明顯區(qū)別,革蘭氏染色鏡檢也無(wú)明顯差別。小鼠攻毒實(shí)驗(yàn)顯示aro C缺失菌株相對(duì)野生菌SC19毒力明顯減弱,aro C參與細(xì)菌芳香族氨基酸的合成,該酶缺失的菌株表現(xiàn)為營(yíng)養(yǎng)匱乏型,在宿主體內(nèi)由于缺少必需的氨基酸而無(wú)法正常生長(zhǎng),表現(xiàn)出較低的毒力。4.豬鏈球菌2型aro C基因缺失突變株與野生菌株SC19誘導(dǎo)炎巨噬細(xì)胞產(chǎn)生炎性應(yīng)答的比較研究發(fā)現(xiàn)aro C基因缺失突變株相對(duì)野生菌株SC19能誘導(dǎo)更高水平的IL1-β與TNF-α;分離野生BALB/C小鼠腹腔巨噬細(xì)胞也得到了類似的結(jié)果。由于分支酸合成酶主要產(chǎn)于營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)的代謝,猜測(cè)aro C基因缺失后可能會(huì)導(dǎo)致細(xì)菌暴露出了更多的促炎性反應(yīng)介質(zhì),進(jìn)而導(dǎo)致其能產(chǎn)生更高的炎性反應(yīng)。5.豬鏈球菌感染小鼠不同時(shí)期豬鏈球菌分支酸合成酶的表達(dá)變化取合適劑量SC19感染小鼠,分別選取感染不同時(shí)期從血里面分離細(xì)菌,之后用實(shí)時(shí)熒光定量的方法檢測(cè)該基因在感染不同時(shí)期的表達(dá)水平的變化。結(jié)果顯示,在9h時(shí)該基因表達(dá)量最高,之后慢慢下降。以上結(jié)果表明,aro C基因在豬鏈球菌感染小鼠過(guò)程中發(fā)揮著一定的作用,不同時(shí)期表達(dá)有一個(gè)明顯的變化
[Abstract]:Streptococcus suis (Streptococcus suis S.suis) is an important zoonotic pathogen, the capsular polysaccharide can be divided into 33 serotypes (1-31,33 and 1/2), including Streptococcus suis serotype 2 (Streptococcus suis serotype 2) the most widely distributed, the most serious harm. Pigs infected with Streptococcus suis, usually exhibit the following symptoms: such as arthritis, meningitis, endocarditis, or septicemia. Disease of Swine Streptococcus suis infection after the immune system will be activated, conducive to disease resistance of Swine Streptococcus suis invasion, but if the host immune response to invasion over time can cause the condition to further produce septic shock. Some studies with inactivated Streptococcus suis stimulation of human or mouse astroglial cells or macrophages that proinflammatory cytokines can produce higher. These studies also indicate that some proinflammatory components exist in Streptococcus suis and this. Some components in the resulting host plays an important role in the process of sepsis, but these components need to be further identified and verified. This study confirms the pro-inflammatory effects of the surface protein of Streptococcus suis chorismate synthase, and the specific mechanisms of inflammatory reaction further research development. The main research are as follows type 2: Branch acid synthase 1. Streptococcus suis proinflammatory in vitro in mouse macrophages on RAW264.7 expressed in Escherichia coli and purified chorismate synthase, RAW264.7 cells were taken as the study model branch acid synthase proinammatory. The results showed that the protein can induce RAW264.7 cells to produce higher levels of IL1- beta and TNF- alpha.2. of Streptococcus suis serotype 2 type chorismate synthase proinflammatory mechanisms research found that TLR4 antibody can inhibit the inflammatory response caused by chorismate synthetase, and TLR2 antibody could not stop Break this reaction. The experimental results show that NF- and P38 caused by kappa B in Aro C after RAW264.7 stimulation of IL-1 beta increases; the plant construction and biological characteristic analysis of experimental construction of aro C gene deletion mutant of Streptococcus suis caused NF- kappa B in Aro C RAW264.7 after the stimulation of TNF- alpha upregulated.3. of Streptococcus suis type 2 aro C gene deletion mutation, then the biological characteristics of the mutant were analyzed, the results showed no significant difference between the growth curve of aro C gene deletion and SC19 wild strains, Gram staining also showed no significant difference. Mouse challenge experiments showed that aro C deletion mutant relative to the wild strain SC19 markedly attenuated virulence, aro C involved in the synthesis of bacteria aromatic amino acids, the enzyme deficient strains showed a lack of nutrition, in vivo due to the lack of essential amino acids to normal growth, showed low virulence of Streptococcus suis type 2 aro.4. The C gene deletion mutant compared with wild-type strain SC19 induced inflammatory macrophages to produce inflammatory response aro C mutant relative to wild-type strain SC19 can induce higher levels of IL1- and TNF- alpha beta; from wild mouse peritoneal macrophages BALB/C also yielded similar results. The chorismate synthase produced mainly in nutrients the metabolism of speculation that aro C gene deletion may cause bacteria exposed to proinflammatory mediators more, causing it can produce proper dose of SC19 mice infected mice expression of Streptococcus suis chorismate synthetase in different periods of the inflammatory reaction of.5. of Streptococcus suis higher infection, infection were selected in different periods of bacteria isolated from blood inside, followed by real time fluorescence quantitative method to detect the changes in gene expression level in different periods of infection. The results showed that in the 9h group The results showed that aro C gene played a role in the process of Streptococcus suis infection in mice.

【學(xué)位授予單位】：華中農(nóng)業(yè)大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2015
【分類號(hào)】：S855.11

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