本文關(guān)鍵詞： TAIL-PCR 染色體步移 研究進展 應(yīng)用　出處：《南方農(nóng)業(yè)學(xué)報》2017年05期 　論文類型：期刊論文

【摘要】：熱不對稱交錯PCR(TAIL-PCR)是一種以PCR為基礎(chǔ)的染色體步移,主要用于分離已知基因的側(cè)翼序列,具有簡便、快速、高效、特異性強等特點。文章從TAIL-PCR的原理、優(yōu)勢及局限性、反應(yīng)體系優(yōu)化等方面對TAIL-PCR的研究進展進行綜述,其中在畜牧獸醫(yī)中主要用于已知基因側(cè)翼克隆和轉(zhuǎn)基因動物模型外源基因插入位點確定。但由于基因組DNA的龐大和復(fù)雜性,使得從基因組中克隆獲得目的基因仍存在諸多限制因素,如特異性引物錯配和隨機引物結(jié)合位點不確定,易造成非特異性產(chǎn)物的產(chǎn)生;模板GC含量異�；虼嬖诟叨戎貜�(fù)序列時,即使使用多種簡并引物也難以獲得陽性產(chǎn)物。因此,應(yīng)根據(jù)實際情況對TAIL-PCR進行靈活調(diào)整。當(dāng)模板較復(fù)雜時,可借鑒連接介導(dǎo)PCR原理,給引物加上接頭,提高擴增反應(yīng)的特異性;當(dāng)模板較簡單或序列較清晰時,可根據(jù)模板特點(如高GC含量)或已知模板序列設(shè)計引物、調(diào)整反應(yīng)條件,增加操作的簡便性;還可參考Suppression-PCR原理,選擇引物和反應(yīng)條件,獲得較長的擴增片段。此外,TAIL-PCR可與多種技術(shù)聯(lián)合使用,促使其在畜牧獸醫(yī)中獲得更廣泛深入的應(yīng)用。
[Abstract]:Thermal asymmetric staggered PCR (TAIL-PCR) is a kind of chromosome step based on PCR, which is mainly used to isolate the flanking sequence of known genes. It is simple, fast and efficient. The principle, advantages and limitations of TAIL-PCR and the optimization of reaction system are reviewed in this paper. It is mainly used in animal husbandry and veterinarian for the cloning of known gene flanking and the determination of foreign gene insertion site in transgenic animal model. But because of the large and complex genomic DNA. There are still many limiting factors for cloning and obtaining target genes from genomes, such as mismatch of specific primers and uncertainty of random primer binding sites, which can easily lead to the production of non-specific products. When the GC content of template is abnormal or there is a high repeat sequence, it is difficult to obtain positive products even if multiple degenerate primers are used. The TAIL-PCR should be adjusted flexibly according to the actual situation. When the template is more complex, we can use the principle of ligation mediated PCR and add the primers with the connector to improve the specificity of the amplification reaction. When the template is simple or the sequence is clear, primers can be designed according to the characteristics of template (such as high GC content) or known template sequence to adjust the reaction conditions and increase the simplicity of operation. According to the principle of Suppression-PCR, we can select primers and reaction conditions to obtain longer amplified fragments. In addition, TAIL-PCR can be used in combination with many techniques. It promotes its wider and deeper application in animal husbandry and veterinary medicine.
【作者單位】： 廣西獸醫(yī)研究所/廣西動物疫病病原生物學(xué)與診斷重點實驗室;亞熱帶農(nóng)業(yè)生物資源保護與利用國家重點實驗室;廣西大學(xué)生命科學(xué)與技術(shù)學(xué)院;
【基金】：國家自然科學(xué)基金項目(31260613) 廣西自然科學(xué)基金項目(2013GXNSFBA019123) 廣西畜禽疫苗新技術(shù)重點實驗室開放基金項目(14-045-31-B-5)
【分類號】：Q78;S85
【正文快照】： 0引言獲得較完整基因序列是研究基因結(jié)構(gòu)、功能和表達調(diào)控的必要條件,確定外源基因的插入位點是建立轉(zhuǎn)基因動植物模型和插入突變體后的首要步驟,掌握反轉(zhuǎn)錄病毒科病毒在宿主基因組中的整合位點是研究病毒致病機理的根本前提,而開展這些研究均需要從已知基因序列出發(fā),通過染色

【相似文獻】

相關(guān)期刊論文 前7條

1 梁成真;張銳;郭三堆;;染色體步移技術(shù)研究進展[J];生物技術(shù)通報;2009年10期

2 劉秋云,JayC.Dunlap;利用RFLP數(shù)據(jù)進行定向染色體步移[J];科學(xué)通報;1996年03期

3 李偉;李慧;陳曉陽;WU Harry;;利用染色體步移PCR檢測輻射松的單核苷酸多態(tài)性[J];西北植物學(xué)報;2007年08期

4 李付鵬;伍寶朵;馬朝芝;傅廷棟;;基于PCR的染色體步移技術(shù)研究進展[J];中國生物工程雜志;2010年12期

5 劉博;蘇喬;湯敏謙;袁曉東;安利佳;;應(yīng)用于染色體步移的PCR擴增技術(shù)的研究進展[J];遺傳;2006年05期

6 康丹;方小艷;游騰飛;王婷婷;眭安平;楊星勇;;染色體步移技術(shù)克隆已知序列側(cè)翼啟動子的研究進展[J];農(nóng)業(yè)生物技術(shù)學(xué)報;2013年03期

7 余春芳;李孝霞;譚玉梅;劉永翔;劉作易;;謝瓦氏曲霉間型變種nsdD基因全長克隆及序列分析[J];貴州農(nóng)業(yè)科學(xué);2013年09期

，

本文編號：1457121