發(fā)布時間：2018-01-21 17:59

  本文關(guān)鍵詞： 遼西 豬產(chǎn)業(yè)鏈 鏈球菌 耐藥性 傳遞　出處：《錦州醫(yī)科大學》2017年碩士論文　論文類型：學位論文

【摘要】：目的為明確鏈球菌耐藥性產(chǎn)生的原因及發(fā)展趨勢,探究遼西地區(qū)豬產(chǎn)業(yè)鏈鏈球菌耐藥性之間的聯(lián)系,研究鏈球菌耐藥性在同屬異種及異屬異種細菌之間的傳遞,對降低因細菌耐藥性的產(chǎn)生而對動物疾病防治及公共衛(wèi)生安全所帶來的危害有重要意義,為指導臨床合理用藥、提高療效及制定有針對性的控制措施提供依據(jù)。方法對從遼西地區(qū)某重點養(yǎng)殖豬場、對應下游屠宰場及其覆蓋的肉品銷售市場分離獲得的163株豬源鏈球菌和8株人源鏈球菌,用鏈球菌培養(yǎng)基分離培養(yǎng),應用形態(tài)觀察、生化實驗、16Sr RNA基因檢測方法鑒定,對鑒定的鏈球菌采用微量稀釋法進行多種獸用和人用抗菌藥物敏感性檢測,并參照CLSI制定的腸球菌判定標準進行判定。對遼西豬鏈不同環(huán)節(jié)分離的鏈球菌的耐藥種類、耐藥比例等方面比較分析。選擇共同耐藥率較高的藥物進行主要耐藥基因的檢測,比較分析各環(huán)節(jié)鏈球菌耐藥基因種類及其耐藥基因檢出率,對其共同攜帶的耐藥基因進行同源性比對分析。通過對豬產(chǎn)業(yè)鏈主要環(huán)節(jié)豬鏈球菌耐藥普、耐藥基因普、耐藥基因同源性比對、分析,說明鏈球菌耐藥性是否在豬產(chǎn)業(yè)鏈中發(fā)生了傳遞。為進一步驗證鏈球菌耐藥性是否可以發(fā)生水平傳播,以分離獲得的耐藥菌株作為供體菌,疊氮化鈉耐藥大腸埃希桿菌J53、鏈球菌ATCC 29212作為受體菌進行質(zhì)粒接合轉(zhuǎn)移試驗,將實驗獲得的接合子進行耐藥性及耐藥基因檢測和序列同源性分析,驗證耐藥性及耐藥基因是否可以在不同菌株間傳遞,初步分析鏈球菌耐藥性的傳遞方式。結(jié)果藥物敏感性檢測結(jié)果顯示:產(chǎn)業(yè)鏈各環(huán)節(jié)中分離的豬源和人源鏈球菌同時對9種獸用抗菌藥物(泰樂菌素、鏈霉素、環(huán)丙沙星、四環(huán)素、林可霉素、慶大霉素、青霉素、紅霉素、多黏菌素E)和10種人用抗菌藥物(青霉素、阿莫西林、奎奴普汀、四環(huán)素、復方新諾明、頭孢噻肟、紅霉素、克林霉素、左氧氟沙星、萬古霉素)產(chǎn)生表觀耐藥性。選取共同耐藥率較高的3類(大環(huán)內(nèi)酯類、四環(huán)素類、多黏菌素E類)抗菌藥物的9種主要相關(guān)基因進行檢測,結(jié)果顯示分離菌株攜帶的共同耐藥基因有6種,分別是:tet L、Mcr-1、Erm B、tet O、tet M、Mef A/E,其中分離自養(yǎng)豬場、屠宰場和銷售市場的豬源鏈球菌對四環(huán)素類耐藥基因tet L的檢出率最高,分別為91.89%、82.35%和90.48%,對多黏菌素E類耐藥基因Mcr-1、大環(huán)內(nèi)酯類耐藥基因Erm B和Erm A的檢出率也較高,均達50%以上。人源鏈球菌對四環(huán)素類耐藥基因tet L和大環(huán)內(nèi)酯類耐藥基因Erm B的檢出率最高達100%,對多黏菌素E類耐藥基因Mcr-1和大環(huán)內(nèi)酯類耐藥基因Mef A/E的檢出率分別為50%和62.5%。對檢出率較高的耐藥基因tet L、Erm B和Mcr-1進行同源性比對分析,結(jié)果顯示,分離自養(yǎng)豬場、屠宰場、銷售市場的豬源鏈球菌和分離自養(yǎng)豬場的人源鏈球菌耐藥基因tet L和Erm B同源性較高,均達到97%以上,其中tet L耐藥基因同源性達到了100%,上述結(jié)果顯示,在遼西豬產(chǎn)業(yè)鏈三個主要環(huán)節(jié)分離到的鏈球菌對多種常用獸用及人用抗菌藥物產(chǎn)生共同表觀耐藥,并檢出多種同類耐藥基因,其中檢出率較高的同類耐藥基因具有高度同源性,該結(jié)果提示細菌耐藥性及其耐藥基因在豬產(chǎn)業(yè)鏈各環(huán)節(jié)以及豬和人之間發(fā)生了傳遞。質(zhì)粒接合轉(zhuǎn)移實驗結(jié)果表明:接合子中檢出四環(huán)素類耐藥基因tet L和大環(huán)內(nèi)酯類耐藥基因Erm B,接合子的耐藥性檢測證明,接合子對上述耐藥基因所對應的藥物:泰樂菌素、鏈霉素、四環(huán)素、林可霉素、紅霉素產(chǎn)生了耐藥,說明鏈球菌耐藥基因可通過質(zhì)粒在不同來源的鏈球菌之間傳播,也可以通過質(zhì)粒在不同種屬細菌之間傳播,從而導致耐藥性的傳遞。結(jié)論1、遼西豬產(chǎn)業(yè)鏈主要環(huán)節(jié)所分離的豬源鏈球菌對多種獸用和人用抗菌藥物產(chǎn)生了共同耐藥性,并攜帶具有高度同源性的共同耐藥基因。在豬和人之間也發(fā)生了鏈球菌耐藥性的傳遞。2、遼西豬產(chǎn)業(yè)鏈中主要環(huán)節(jié)鏈球菌共同攜帶的tet L和Erm B耐藥基因,可通過質(zhì)粒介導在同屬異種及異屬異種細菌之間傳播。鏈球菌耐藥性在豬產(chǎn)業(yè)鏈各環(huán)節(jié)和豬與人間可發(fā)生傳遞。
[Abstract]:Objective to produce a clear reason and developing trend of antimicrobial resistance of Streptococcus, western Liaoning pig industry chain between the study of antimicrobial resistance of Streptococcus contact on antimicrobial resistance of Streptococcus in heterogeneous and belong to different genus of dissimilar transfer between bacteria, to reduce the emergence of drug resistance of bacteria and harmful to animal disease prevention and public health safety brought has important significance to guide clinical rational drug use and improve the curative effect and provide basis for control measures. Methods from the farm a key culture in western Liaoning, the corresponding downstream slaughterhouse and covering the meat market isolated 163 strains of Streptococcus suis and obtained 8 strains of Streptococcus, Streptococcus pneumoniae isolated and cultured with medium, using morphological observation biochemical experiments, identification, detection of 16Sr RNA gene of Streptococcus, identified by microdilution method for a variety of antimicrobial drug use and the beast The sensitivity of detection, and the judgment standard for judging according to the CLSI formulation of Enterococcus. Type of resistance to separate the link chain in swine streptococcus, comparative analysis and so on. The proportion of drug resistance detection of drug selection common drug resistance rate is higher for the main resistance genes, resistance genes detection rate of Streptococcus species and resistance genes in each link of the analysis. The common resistance genes carried by homology analysis. The main part of the industrial chain of Pig Streptococcus suis resistant Pu, Pu resistant gene, resistance gene homology analysis, description of drug resistance bacteria in pig industry chain transfer occurred. To verify whether the level of antimicrobial resistance of Streptococcus can spread, resistant strains to isolate as a donor, sodium azide resistant Escherichia coli J53, Streptococcus ATCC 29212 as the receptor bacteria plasmid conjugation Transfer test, the experiment of the transconjugants were detected and the sequence of drug resistance and resistance gene homology analysis, whether drug resistance and drug resistance genes can be transferred between different strains of verification, preliminary analysis of transmission of antimicrobial resistance of Streptococcus. The results of drug sensitivity test results show that: the separation of each link in the chain of swine streptococcus and at the same time 9 kinds of antibacterial drugs on animal (tylosin, streptomycin, ciprofloxacin, tetracycline, clindamycin, gentamicin, penicillin, erythromycin, polymyxin E) and 10 with antibiotics (penicillin, amoxicillin, quinupristin, tetracycline, cotrimoxazole, erythromycin, cefotaxime. Clindamycin, levofloxacin, vancomycin) have apparent resistance. Select 3 kinds of common drug resistance rate is higher (macrolides, tetracyclines, polymyxin E) examined 9 major genes related to antibacterial drugs Test results show the common resistance genes in isolates carrying 6 kinds, respectively is: Tet L, Mcr-1, Erm B, Tet O, Tet M, Mef A/E, of which the highest detection rate of autotrophic separation farms, slaughterhouses and sales of swine streptococcus of the tetracycline resistance gene tet and L, respectively 91.89%, 82.35% and 90.48%, the polymyxin E resistance gene Mcr-1, macrolide resistant gene Erm B and Erm A detection rate is higher, reached more than 50%. The detection rate of up to 100% of the tetracycline resistance gene of Streptococcus Tet L and macrolide resistance gene Erm B that of polymyxin E resistance gene Mcr-1 and macrolide resistance gene Mef A/E detection rates were 50% and 62.5%. on the high detection rate of drug resistance gene tet L, Erm B and Mcr-1 homology comparison analysis, results showed that the separation of autotrophic farms, slaughterhouses, sales market of swine streptococcus and Isolated from pig people Streptococcus resistant gene tet L and Erm B homology, reached more than 97%, of which Tet L resistance gene homology reached 100%, the results showed that the isolated in three major aspects of the industry chain of pig streptococcus to a variety of commonly used veterinary and human use of Antibacterials in common the apparent drug resistance, and found many similar resistance genes, resistance genes and similar high detection rate with a high degree of homology, the results suggest that the bacterial resistance and resistance gene transfer in the pig industry chain, each link between pig and human. Plasmid conjugation experiment results show that the tetracycline resistance gene tet L and macrolides the Erm B class of resistance genes detected in the zygote zygote, the detection of drug resistance, drug transconjugants corresponding to the resistance gene, tylosin, tetracycline, streptomycin, lincomycin, erythromycin Hormone resistance, resistance genes that Streptococcus by plasmids between different sources of Streptococcus transmission, also can through the plasmid in different species of bacteria spread, resulting in drug resistance transfer. Conclusion 1 swine streptococcus mainly in pig industry chain link from a variety of animal and people have a common resistance use of antibiotics, and carry a high similarity common resistance genes. Between pig and human also happened to pass.2 Tet L and the antimicrobial resistance of Streptococcus, Streptococcus Erm B resistance gene in the pig industry chain in the main link together to carry, through plasmid mediated communication between heterogeneous and dissimilar bacteria belong to different. Transfer of antimicrobial resistance of Streptococcus can occur in the pig industry chain and pig and human.

【學位授予單位】：錦州醫(yī)科大學
【學位級別】：碩士
【學位授予年份】：2017
【分類號】：S852.611

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本文編號：1452175