本文關(guān)鍵詞： 禽流感病毒 H5亞型 單克隆抗體　出處：《湖南農(nóng)業(yè)大學(xué)》2015年碩士論文　論文類型：學(xué)位論文

【摘要】：本研究采用高致病性禽流感病毒(HPAIV) H5亞型A/duck/Guangdong/S 1322/201 0(DK/GD/S1322/2010)、A/duck/Xinjiang/S3391/2012(DK/XJ/S3391/2012)、A/chicken/Li aoning/S4092/2011 (CK/LN/S4092/2011)三株毒株作為免疫原,免疫6周齡到8周齡BALB/c雌性小鼠,使用經(jīng)過加強免疫后小鼠脾細(xì)胞同骨髓瘤細(xì)胞(SP2/0)融合,使用血凝抑制(HI)和ELISA方法篩選,得到6株H5亞型HA特異性單克隆抗體(McAbs),分別命名為A4、D11、F3、G2/B6、C8。HI檢測A4、D11、F3、G2、B6、C8六株單抗的細(xì)胞培養(yǎng)上清和腹水抗體效價分別為23、22、23、24、22、22和211、211、213、213、28、28。獲得的6株單抗的重鏈均為IgG1和IgM,輕鏈均為k鏈。染色體計數(shù)分析各株雜交瘤細(xì)胞的平均染色體數(shù)在102-108之間。6株單克隆抗體HI試驗和中和實驗顯示,6株單克隆抗體不與其他亞型流感病毒反應(yīng),A4、D11與親本毒株DK/GD/S1322/2010所在clade2.3.2分支病毒反應(yīng)性良好。不與clade2.3.4和7分支病毒反應(yīng)；F3、G2與親本毒株DK/XJ/S3391/2012所在clade2.3.4分支病毒同源性較高的H5N8亞型病毒反應(yīng)性較好,與大部分2.3.4分支病毒、2.3.2、7分支病毒不反應(yīng)；B6、C8與親本毒株CK/LN/S4092/2011所在的7分支病毒也是部分反應(yīng)。所制備的單克隆抗體含有識別親本毒株的抗原位點,且在雞胚中和實驗中表現(xiàn)一定的中和活性。IFA結(jié)果表面,6株單克隆抗體能夠識別MDCK細(xì)胞內(nèi)感染的H5亞型禽流感病毒親本毒株。利用DK/GD/S 1322/2010病毒株和PCAGGS載體構(gòu)建HA蛋白質(zhì)粒,通過、Vestern-blot反應(yīng)能夠與人工合成的HA蛋白反應(yīng)。HA亞型特異性單克隆抗體的制備成功為H5亞型AIV的診斷與鑒別奠定了物質(zhì)基礎(chǔ)。
[Abstract]:In this study, the H5 subtype of highly pathogenic avian influenza virus (HPAIV) was subtype A / duckr / Guangdongr / S 1322/201 (. DK / GD / S 1322 / 2010. A / A / DK / XJ / Xinjiang / S 3391 / 2012DK / XJ / S 3391 / 2012). Three strains of the virus were used as immunogen for Ar / chicken / Li aoning/S4092/2011 / LN / LN / S4092 / 2011. BALB/c female mice aged from 6 weeks to 8 weeks were immunized and fused with myeloma cells (SP2 / 0) after enhanced immunization. Six strains of H5 subtype HA-specific monoclonal antibody were screened by hemagglutination inhibition (HI) and ELISA, and named A4D11F3F3G2 / B6, respectively. The titers of supernatant and ascites antibody of A4D11F3G2OB6C8 McAbs were 2322, 2324, 2222 and 211, respectively, by C8.The titers of antibody in culture supernatant and ascitic fluid were 2322 and 211, respectively. The heavy chains of the 6 McAbs were IgG1 and IgM. The average chromosome number of the hybridoma cells was 102-108. 6 strains of monoclonal antibody HI test and neutralization test showed. 6 strains of monoclonal antibodies did not react with other subtypes of influenza virus (A4). D11 reacted well with the clade2.3.2 branch of parent strain DK/GD/S1322/2010 and did not react with clade2.3.4 and 7 branch virus. F3G 2 was more responsive to the H5N1 N8 subtype virus, which was homologous to the clade2.3.4 branch of the parent strain DK/XJ/S3391/2012. It did not react with most of the 2. 3. 4 branch virus (2. 3. 2). B6C8 also partially reacted with the 7 branch viruses of parent strain CK/LN/S4092/2011. The monoclonal antibodies prepared contained antigenic sites to recognize parental strains. And showed certain neutralization activity in chicken embryo neutralization experiment. IFA result surface. 6 strains of monoclonal antibody could recognize the parent strain of H5 subtype avian influenza virus infected in MDCK cells. DK/GD/S was used to identify the H5 subtype avian influenza virus strain. 1322/2010 virus strain and PCAGGS vector were used to construct HA protein particles. Yes. The Vestern-blot reaction can react with synthetic HA protein. The preparation of HA subtype specific monoclonal antibody has laid a solid foundation for the diagnosis and identification of H5 subtype AIV.
【學(xué)位授予單位】：湖南農(nóng)業(yè)大學(xué)
【學(xué)位級別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2015
【分類號】：S852.65

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本文編號：1447797