本文關(guān)鍵詞：幾種佐劑對豬O型FMDV重組多表位抗原免疫原性的影響　出處：《甘肅農(nóng)業(yè)大學(xué)》2016年碩士論文　論文類型：學(xué)位論文

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【摘要】：口蹄疫(foot-and-mouth disease,FMD)是由口蹄疫病毒(foot-and-mouth disease virus,FMDV)引起的急性、熱性、高度接觸性傳染病,世界動物衛(wèi)生組織(OIE)將其列為發(fā)病必須報告的疫病,我國將其列為一類動物疫病。FMD曾經(jīng)在世界多個國家和地區(qū)出現(xiàn)過大流行,嚴重威脅著畜牧業(yè)的發(fā)展。疫苗免疫是防控FMD的綜合措施之一。近年來,表位疫苗的研究以及為表位疫苗選擇高效的免疫佐劑成為了研究熱點。我國流行的O型FMDV毒株包括O/HN/CHA/93、O/Mya/98和O/Tibet/CHA/99,嚴重危害著養(yǎng)豬業(yè)的發(fā)展。為了研制豬O型FMDV廣譜多表位疫苗,本實驗將編碼3個毒株VP1蛋白135~160aa和200~213aa表位的基因進行串聯(lián),命名為RE。利用BamH I、EcoR I、HindⅢ、Xho I 4種限制性內(nèi)切酶及其酶切位點,將合成的RE基因和豬Ig G重鏈恒定區(qū)基因依次克隆到pMD18-T載體構(gòu)建重組質(zhì)粒。利用相同的限制性內(nèi)切酶,將克隆得到的2種基因?qū)朐吮磉_載體pET-30a(+),構(gòu)建重組表達質(zhì)粒pE-IgG。重組質(zhì)粒轉(zhuǎn)化大腸桿菌BL21(DE3)感受態(tài)細胞,通過IPTG誘導(dǎo)表達得到融合蛋白pE-IgG-672。對表達產(chǎn)物進行SDS-PAGE電泳分析、純化及Western blot鑒定。鑒定正確后,分別用5種免疫佐劑ISA206、ISA201、IMS1313、603、ISA61乳化融合蛋白,按照每頭份0.5mL(含25μg重組抗原)的劑量配制成疫苗,背部多點注射免疫BALB/c雌鼠做免疫效力試驗。通過間接ELISA方法測定抗體水平,并利用流式細胞術(shù)檢測淋巴細胞亞群的分泌情況,比較幾種佐劑的免疫功效,以便篩選出最適合于本疫苗的免疫佐劑。結(jié)果表明:重組蛋白pE-IgG-672以包涵體的形式表達,能與O型FMDV標準陽性血清發(fā)生特異性反應(yīng),具有很強的反應(yīng)原性;通過間接ELISA和流式細胞術(shù)的檢測結(jié)果分析,證實了5種佐劑中,ISA201佐劑和603佐劑在小鼠體內(nèi)的佐劑效應(yīng)優(yōu)于其他佐劑,ISA201佐劑的優(yōu)勢更為明顯。
[Abstract]:The recombinant plasmid pE - IgG - 672 was cloned into prokaryotic expression vector pET - 30a ( + ) . The recombinant plasmid pE - IgG - 672 was cloned into prokaryotic expression vector pET - 30a ( + ) .

【學(xué)位授予單位】：甘肅農(nóng)業(yè)大學(xué)
【學(xué)位級別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2016
【分類號】：S852.4

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本文編號：1389263