本文關鍵詞：亞硒酸鈉對脫氧雪腐鐮刀菌烯醇致體外培養(yǎng)豬脾臟淋巴細胞氧化損傷的保護作用研究　出處：《四川農(nóng)業(yè)大學》2016年碩士論文　論文類型：學位論文

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【摘要】：本研究通過體外原代培養(yǎng)豬脾臟淋巴細胞,單獨/聯(lián)合添加脫氧雪腐鐮刀菌烯醇(DON)、亞硒酸鈉(Na_2SeO_3),探討Na_2SeO_3對DON致豬脾臟淋巴氧化損傷的保護作用。方法：(1)通過分別添加不同濃度DON (0.0625 μg/mL、0.125 μg/mL、0.25 μg/mL、 0.5 μg/mL、1 μg/mL、2 μg/mL、4 μg/mL、8 μg/mL、16 μg/mL、32 μg/mL)、 Na_2SeO_3 (0.25 μmol/L、0.5 μmol/L、1 μmol/L、2 μmol/L、4 μmol/L、8 μmol/L、 16 μmol/L),體外原代培養(yǎng)豬脾臟淋巴細胞48h后,采用CCK-8法檢測細胞活力,計算DON致豬脾臟淋巴細胞IC50及Na_2SeO_3作用于豬脾臟淋巴細胞最適營養(yǎng)濃度。(2)正式試驗分10組,分別為D1 (DON 824 ng/mL), D2 (DON412 ng/mL), D3(DON 206 ng/mL), D4(DON 103 ng/mL), S(Na_2SeO_32 μmol/L), SD1 (Na_2SeO_3 2 μmol/L+DON 824 ng/mL), SD2 (Na_2SeO_32 μmol/L+DON 412 ng/mL), SD3 (Na_2SeO_32 μmol/L+DON206ng/mL), SD4(Na_2SeO_32 μmol/L+DON 103ng/mL),對照組,于體外培養(yǎng)豬脾臟淋巴細胞6、12、24和48h后,分別檢測細胞活力,細胞培養(yǎng)上清液乳酸脫氫酶(LDH)活性,細胞內(nèi)谷胱甘肽過氧化物酶(GPx)、超氧化物歧化酶(SOD)、過氧化氫酶(CAT)活性,細胞總抗氧化能力(T-AOC)和抑制羥自由基能力,細胞丙二醛(MDA)、谷胱甘肽(GSH)和過氧化氫(H2O2)含量。結果：(1)培養(yǎng)48h后,與對照組相比,除0.0625 μg/mL組外,其余各試驗組均極顯著降低豬脾臟淋巴細胞活力(P0.01),并得出DON致豬脾臟淋巴細胞IC50為0.82±0.35 μg/mL; Na_2SeO_3在0.25-4 μmol/L能夠顯著提高脾臟淋巴細胞活力(P0.01),其濃度提高到16 μmol/L時明顯降低細胞活力(P0.01),并得出Na_2SeO_3最適營養(yǎng)濃度為2 μmol/L。(2)單獨添加DON作用于豬脾臟淋巴細胞,與對照組相比,除D4組個別指標外,其余各組細胞上清液LDH活性,MDA和H202含量均明顯升高(P0.05或P0.01)；細胞活力,GSH含量,GPx、SOD、CAT活性,T-AOC和抑制羥自由基能力均明顯下降(P0.05或P0.01)。(3)單獨添加Na_2SeO_3作用于豬脾臟淋巴細胞,與對照組相比,細胞活力、細胞GPx活性(12、24和48 h)、T-AOC和抑制羥自由基能力均明顯提高(P0.05或P0.01),細胞H202含量(12和24 h)、MDA含量(24和48 h)均明顯降低(P0.05或P0.01)。(4)聯(lián)合添加DON和Na_2SeO_3作用于豬脾臟淋巴細胞,在整個試驗期間,與單獨添加DON組相比,聯(lián)合添加DON和Na_2SeO_3組細胞活力、抗氧化酶(GPx、 SOD、CAT)活性、T-AOC、細胞抑制羥自由基能力、GSH含量均提高,細胞內(nèi)MDA和H202含量、培養(yǎng)上清液LDH活性均下降。其中,在24 h時,與單獨添加DON組相比,聯(lián)合添加DON和Na_2SeO_3組細胞活力(SD3和SD4組)、GSH含量、GPx活性(SD1組除外)、SOD活性(SD3和SD4組)、CAT活性(SD3和SD4組)、T-AOC及抑制羥自由基能力(SD3組除外)均明顯提高(P0.05或P0.01),細胞內(nèi)H202和MDA含量及上清液LDH活性均明顯下降(P0.05或P0.01)。結論：DON暴露能夠導致豬脾臟淋巴細胞抗氧化功能降低,導致細胞活力下降。0.25-4 μmol/LNa_2SeO_3能夠明顯提高淋巴細胞活力,16 μmol/LNa_2SeO_3則對豬脾臟淋巴細胞產(chǎn)生毒性作用。在本試驗條件下,2 μmol/L的Na_2SeO_3對DON誘導的豬脾臟淋巴細胞氧化損傷具有一定程度抑制作用,且在24 h時Na_2SeO_3對DON誘導豬脾臟淋巴細胞氧化損傷的抑制作用最佳。
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【學位授予單位】：四川農(nóng)業(yè)大學
【學位級別】：碩士
【學位授予年份】：2016
【分類號】：S859.8

【參考文獻】

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