本文關(guān)鍵詞：禽網(wǎng)狀內(nèi)皮增生病病毒RT-PCR檢測(cè)方法的建立及其應(yīng)用　出處：《東北農(nóng)業(yè)大學(xué)》2016年碩士論文　論文類(lèi)型：學(xué)位論文

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【摘要】：本研究應(yīng)用現(xiàn)代分子生物技術(shù),以1日齡SPF雛雞為研究對(duì)象,利用被網(wǎng)狀內(nèi)皮組織增生病病毒感染雛雞的cDNA為模板,選取相對(duì)保守的LTR序列,設(shè)計(jì)并合成出特異性引物,建立了RT-PCR檢測(cè)方法,并對(duì)該檢測(cè)方法進(jìn)行優(yōu)化。在此基礎(chǔ)上,又結(jié)合生物學(xué)檢測(cè)技術(shù),對(duì)試驗(yàn)中感染REV的SPF雛雞心臟、脾臟、肝臟、肺臟、腎臟、胸腺和法氏囊進(jìn)行檢測(cè),同時(shí)又對(duì)來(lái)自東北某省養(yǎng)殖場(chǎng)選取的50份現(xiàn)地臨診血液樣品進(jìn)行檢測(cè)。本實(shí)驗(yàn)旨在建立REV的快速、高效檢測(cè)方法,為日后疾病的防治提供重要的科學(xué)基礎(chǔ)和依據(jù)。主要研究結(jié)果如下:(1)成功建立了檢測(cè)網(wǎng)狀內(nèi)皮組織增生病病毒的RT-PCR方法,該檢測(cè)方法能夠有效地?cái)U(kuò)增出目的片段,可在4個(gè)小時(shí)內(nèi)完成對(duì)樣品的檢測(cè);(2)該檢測(cè)方法的最佳優(yōu)化條件為:退火溫度53℃、引物濃度為0.3μmol/L、Mg2濃度為2.5μmol/L;(3)該方法敏感性高,能特異性檢測(cè)REV樣品。對(duì)樣品的反復(fù)多次檢測(cè),檢測(cè)結(jié)果高度一致,該方法具有較高的重復(fù)性和穩(wěn)定性;(4)應(yīng)用上述建立的RT-PCR檢測(cè)方法,對(duì)試驗(yàn)中感染REV的SPF雛雞的各個(gè)主要器官進(jìn)行檢測(cè),結(jié)果表明SPF雛雞各個(gè)主要器官均受到感染。對(duì)東北某省50份現(xiàn)地臨診血液樣品進(jìn)行檢測(cè),結(jié)果顯示,陽(yáng)性率高達(dá)92%。
【學(xué)位授予單位】：東北農(nóng)業(yè)大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2016
【分類(lèi)號(hào)】：S852.65
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本文編號(hào)：1335967