發(fā)布時(shí)間：2017-12-25 13:01

  本文關(guān)鍵詞：牦牛發(fā)情周期中Ovn在輸卵管的表達(dá)及EGF對(duì)其表達(dá)的影響　出處：《甘肅農(nóng)業(yè)大學(xué)》2016年碩士論文　論文類型：學(xué)位論文

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【摘要】：輸卵管蛋白(Ovn)具有促進(jìn)受精和早期胚胎發(fā)育的作用,但有關(guān)Ovn分子特征及其在發(fā)情周期表達(dá)的研究甚少。本研究采用RT-PCR法克隆了牦牛Ovn cDNA序列,并采用qRT-PCR和免疫組織化學(xué)方法檢測(cè)了在卵泡期前期、卵泡期后期、黃體期前期及黃體期后期輸卵管傘部和壺腹部Ovn的表達(dá)差異,從基因和蛋白水平分析牦牛發(fā)情周期輸卵管中Ovn表達(dá)的變化。在此基礎(chǔ)上,通過(guò)對(duì)牦牛輸卵管上皮細(xì)胞體外培養(yǎng)中加入不同濃度的EGF,運(yùn)用qRT-PCR檢測(cè)了Ovn、HIF-1α、Bcl-2和Bax mRNA的表達(dá),從而探討了EGF對(duì)牦牛輸卵管上皮細(xì)胞分泌的調(diào)控作用。研究結(jié)果表明:(1)牦牛Ovn cDNA序列與黃牛(Bos taurus)和印度水牛(Bubalus bubalis)具有很高的同源性;氨基酸序列比對(duì)進(jìn)化樹表明,牦牛Ovn與黃牛的同源性最高,達(dá)到99.1%;成功克隆出牦牛Ovn的cDNA序列,GenBank登錄號(hào):KF303541。(2)卵泡期后期Ovn mRNA的表達(dá)最高,黃體期前期和黃體期后期表達(dá)依次減少,卵泡期前期階段相對(duì)表達(dá)量最低;蛋白免疫標(biāo)記在卵泡期后期和黃體期前期階段較明顯,其他階段則減弱;壺腹部和傘部Ovn mRNA的表達(dá)差異不顯著。(3)原代牦牛輸卵管上皮細(xì)胞貼壁時(shí)間和生長(zhǎng)比較慢,Ovn主要分布在細(xì)胞質(zhì)中;90%FBS+10%DMSO的凍存效果優(yōu)于傳統(tǒng)方法。(4)牦牛輸卵管上皮細(xì)胞體外培養(yǎng)中添加EGF可提高輸卵管上皮細(xì)胞Ovn、HIF-1α和Bcl-2 mRNA的表達(dá),降低Bax mRNA的表達(dá),且其作用濃度具有劑量依賴性,最佳濃度為50 ng?m L-1。本研究得到了包含完整開放閱讀框的牦牛Ovn的cDNA序列,明確了發(fā)情周期中不同階段Ovn mRNA表達(dá)的差異性,并發(fā)現(xiàn)EGF可能是通過(guò)調(diào)控HIF-1α抑制輸卵管上皮細(xì)胞的凋亡、促進(jìn)Ovn分泌。研究結(jié)果為進(jìn)一步揭示EGF在輸卵管上皮細(xì)胞對(duì)卵母細(xì)胞成熟及早期胚胎發(fā)育過(guò)程中的作用機(jī)制提供了理論依據(jù),有助于牦牛胚胎體外發(fā)育技術(shù)改進(jìn)。
【學(xué)位授予單位】：甘肅農(nóng)業(yè)大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2016
【分類號(hào)】：S823.85

【參考文獻(xiàn)】

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本文編號(hào)：1332917