本文關(guān)鍵詞：IBDV-DDK病毒株的全基因組測(cè)定和序列分析　出處：《福建農(nóng)林大學(xué)》2016年碩士論文　論文類型：學(xué)位論文

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【摘要】：雞傳染性法氏囊病(Infectious Bursal Disease, IBD)是由傳染性法氏囊病病母(Infectious Bursal Disease Virus, IBDV)引起的一種急性、高度接觸性傳染病。自超強(qiáng)毒株(vvIBDV)出現(xiàn)后,致病力顯著加強(qiáng)。vvIBDV不僅能夠突破母源抗體保護(hù),感染3-6周齡雛雞,還能夠躲避多數(shù)疫苗株產(chǎn)生的抗體保護(hù)。IBDV-MB株為國(guó)外常用的中等偏強(qiáng)毒力疫苗株,其特征性氨基酸位點(diǎn)與vvIBDV保持基本一致,僅有個(gè)別氨基酸突變,因而在臨床上能夠較為有效防控vvIBDV,該疫苗株從九十年代起就有在國(guó)內(nèi)臨床應(yīng)用研究和使用的報(bào)道。本試驗(yàn)通過(guò)對(duì)IBDV-DDK病毒株的全基因組序列進(jìn)行測(cè)定,并對(duì)其核苷酸序列進(jìn)行同源性分析,明確了該病毒株的遺傳進(jìn)化地位,有助于了解該毒株的變異情況及其與IBDV疫苗株之間的差異,以探求其分子流行特征和變異規(guī)律,為今后控制IBDV的流行和科學(xué)研究提供一定的參考依據(jù)。根據(jù)GenBank公布的IBDV毒株全基因組序列,設(shè)計(jì)出四對(duì)引物用于IBDV-DDK病毒株全基因組序列擴(kuò)增。通過(guò)RT-PCR技術(shù)分段擴(kuò)增出DDK病毒株的核苷酸序列,分別連接到pGEM-T Easy載體上,轉(zhuǎn)化DH5α感受態(tài)細(xì)胞,挑取單克隆菌落,提取質(zhì)粒并進(jìn)行PCR、酶切和測(cè)序鑒定,然后進(jìn)行核苷酸同源性和遺傳進(jìn)化關(guān)系分析。結(jié)果表明,各個(gè)基因片段的重組質(zhì)粒構(gòu)建成功,核苷酸序列分析表明,IBDV-DDK病毒株A節(jié)段大小為3257 bp,含有兩個(gè)開(kāi)放閱讀框(ORF),大閱讀框編碼多聚蛋白VPx,小閱讀框編碼VP5蛋白；B節(jié)段大小為2823 bp,含有一個(gè)ORF,編碼VPl蛋白。通過(guò)與本研究所選參考毒株核苷酸的同源性比對(duì)分析,DDK病毒株A節(jié)段與參考毒株的核苷酸同源性范圍在83.4%-98.3%,其中與MB毒株同源性為98.3%,與血清Ⅱ型23/82和OH毒株同源性為83.4%；B節(jié)段核苷酸同源性范圍在88.9%-98.7%,其中與MB毒株同源性為98.7%,與E毒株同源性為88.9%。遺傳進(jìn)化樹(shù)分析表明,DDK病毒株A、B節(jié)段均與MB、UK661等毒株親緣關(guān)系相對(duì)較近。將DDK病毒株與強(qiáng)弱毒株氨基酸序列進(jìn)行比對(duì)分析表明,DDK病毒株VPx中第222位特征性氨基酸是T,而其他vvIBDV的該位點(diǎn)均為A,中等偏強(qiáng)毒力疫苗MB株和2512株的該位點(diǎn)分別為A和P,常見(jiàn)弱毒疫苗株的該位點(diǎn)為P,且該位點(diǎn)對(duì)于IBDV致病性有重要影響,其余特征性氨基酸與vvIBDV基本保持一致；B節(jié)段相對(duì)于A節(jié)段比較保守,IBDV-DDK病毒株的VP1蛋白中第4位保守性氨基酸位點(diǎn)為I,中等偏強(qiáng)毒力疫苗MB株、2512株和常見(jiàn)弱毒疫苗株的該位點(diǎn)均為I,vvIBDV的該位點(diǎn)均為V。結(jié)果表明,IBDV-DDK病毒株與MB等中強(qiáng)毒力疫苗株在分子特征上有一定關(guān)系。
【學(xué)位授予單位】：福建農(nóng)林大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2016
【分類號(hào)】：S852.65

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