發(fā)布時(shí)間：2017-12-19 02:06

  本文關(guān)鍵詞：兔須癬毛癬菌的鑒定及快速診斷方法的建立

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【摘要】：兔皮膚真菌病是由皮膚癬菌引起的一類傳染性很強(qiáng)的接觸性傳染病。在世界范圍內(nèi)廣泛流行。兔須癬毛癬菌病不僅嚴(yán)重影響?zhàn)B兔業(yè)經(jīng)濟(jì)效益,還是人畜共患傳染病,引起人皮膚真菌病,嚴(yán)重危害養(yǎng)殖生產(chǎn)者及公眾健康。因此,對(duì)須癬毛癬菌進(jìn)行準(zhǔn)確鑒定,并建立特異,敏感的,快速的診斷方法,篩選出有效的抗真菌藥物,對(duì)于養(yǎng)殖生產(chǎn)及公眾健康具有重要意義。采用r DNA-ITS序列分析結(jié)合真菌形態(tài)學(xué)和生理學(xué)試驗(yàn)對(duì)兔須癬毛癬菌進(jìn)行鑒定。從疑似患兔采集皮屑樣品接種沙保弱培養(yǎng)基,觀察菌落特征及菌絲顯微結(jié)構(gòu),并進(jìn)行尿素酶和毛發(fā)穿孔試驗(yàn)。提取分離株(29株)DNA,利用引物ITS1和ITS4進(jìn)行PCR擴(kuò)增,擴(kuò)增產(chǎn)物測(cè)序后在GenBank核酸數(shù)據(jù)庫(kù)中進(jìn)行同源性比對(duì),結(jié)果顯示,分離株的菌落形態(tài)為白色粉末狀,背面有色素沉著,培養(yǎng)可見(jiàn)大量葡萄狀小分生孢子,螺旋菌絲及棒狀大分生孢子;尿素酶和毛發(fā)穿孔試驗(yàn)陽(yáng)性;rDNA-ITS序列比對(duì)結(jié)果顯示,分離株與須癬毛癬菌復(fù)合體中的萬(wàn)博節(jié)皮菌同源性在99.2%以上;從形態(tài)學(xué)和生理學(xué)試驗(yàn)符合須癬毛癬菌的特點(diǎn),結(jié)合分子生物學(xué)試驗(yàn)將29株分離株鑒定為萬(wàn)博節(jié)皮菌。利用幾丁質(zhì)酶基因(CHS1)序列分析結(jié)合菌落特征對(duì)兔須癬毛癬菌分離株(31株)進(jìn)行分型。結(jié)果顯示菌落特征分為顆粒型、粉末型和絨毛型3種表型,其中多數(shù)為顆粒型和粉末型,占87.09%(27/31),基于CHS1序列同源性差異,分成Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ、Ⅳ和Ⅴ5種基因類型,其中Ⅰ型和Ⅱ型是優(yōu)勢(shì)菌株,占54.84%(17/31),這些提示CHS1序列分析可以用于須癬毛癬菌的基因分型。采用SYBR GreenⅠ熒光定量PCR方法對(duì)兔須癬毛癬菌進(jìn)行定量檢測(cè)。結(jié)果表明,利用此方法可以檢測(cè)病原菌DNA的最低稀釋度為10-10,而常規(guī)PCR檢測(cè)病原菌DNA最低稀釋度為10-8。并且,特異性強(qiáng),與犬小孢子菌、絮狀表皮癬、紅毛癬菌、白色念珠菌、煙曲霉等病原真菌沒(méi)有交叉反應(yīng);對(duì)于須癬毛癬菌分離株陽(yáng)性檢出率為100%(10/10),臨床分離須癬毛癬菌陽(yáng)性檢出率為86%(54/63)。證明采用熒光定量PCR方法對(duì)須癬毛癬菌進(jìn)行快速診斷具有良好的可行性。對(duì)31株須癬毛癬菌對(duì)藥物的敏感性進(jìn)行了研究。我們采用了11種常用抗真菌藥物利用紙片擴(kuò)散法進(jìn)行了藥敏試驗(yàn),結(jié)果表明:特比萘芬、克霉唑、伏立康唑?qū)毎_毛癬菌的抑制作用最強(qiáng),31株菌對(duì)這三種藥物敏感率為100%,抗菌效果最好;其次為伊曲康唑、酮康唑、益康唑、兩性霉素-B、制霉菌素、咪康唑,31株菌對(duì)這幾種藥物的敏感率分別為93.55%、90.32%、83.87%、48.39%、32.26%、12.90%;5-氟胞嘧啶、氟康唑的抑菌效果最差,31株菌對(duì)其敏感率都為0%。通過(guò)對(duì)兔場(chǎng)須癬毛癬菌病原菌的分離培養(yǎng)及rDNA-ITS序列分析,對(duì)兔須癬毛癬菌進(jìn)行了鑒定;并基于幾丁質(zhì)酶基因?qū)Ψ蛛x到的31株兔須癬毛癬菌進(jìn)行了基因分型;建立了兔須癬毛癬菌SYBR GreenⅠ熒光定量PCR檢測(cè)方法;通過(guò)進(jìn)行兔須癬毛癬菌藥物敏感性試驗(yàn),進(jìn)一步了解了兔須癬毛癬菌對(duì)抗真菌藥物的敏感性,為臨床用藥提供參考。
【學(xué)位授予單位】：河北工程大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2016
【分類號(hào)】：S858.291

【參考文獻(xiàn)】

中國(guó)期刊全文數(shù)據(jù)庫(kù) 前10條

1 張羽;;須癬毛癬菌復(fù)合體的分類學(xué)研究進(jìn)展[J];熱帶醫(yī)學(xué)雜志;2014年11期

2 劉彥威;柳煥章;劉建釵;劉娜;劉利強(qiáng);王綏華;王慧真;;河北兔場(chǎng)皮膚病原真菌rDNA-ITS序列分析[J];中國(guó)獸醫(yī)學(xué)報(bào);2013年09期

3 劉彥威;劉娜;柳煥章;劉建釵;劉利強(qiáng);張永英;王綏華;;兔須癬毛癬菌的分離與鑒定[J];動(dòng)物醫(yī)學(xué)進(jìn)展;2013年06期

4 劉彥威;劉娜;;兔須癬毛癬菌分類研究進(jìn)展[J];動(dòng)物醫(yī)學(xué)進(jìn)展;2013年05期

5 崔麗娜;高淑霞;姜文學(xué);楊麗萍;張振杰;牛鐘相;;山東兔場(chǎng)皮膚真菌病病原rDNA-ITS區(qū)序列測(cè)定及分析[J];中國(guó)獸醫(yī)學(xué)報(bào);2011年12期

6 林毅;謝晶;李興玉;魏甬;王文貴;張先惠;于吉鋒;羅丹丹;;家兔須癬毛癬菌對(duì)8種抗真菌藥物敏感性研究[J];中國(guó)養(yǎng)兔;2011年04期

7 胡小平;萬(wàn)U，

本文編號(hào)：1306460