本文關(guān)鍵詞：β-內(nèi)酰胺類抗生素耐藥對(duì)化膿隱秘桿菌NanH表達(dá)量及粘附性的影響

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【摘要】：化膿隱秘桿菌是一種革蘭氏陽(yáng)性棒狀桿菌,可引起多種動(dòng)物的化膿性感染,給養(yǎng)殖業(yè)帶來(lái)嚴(yán)重的經(jīng)濟(jì)損失。目前,常使用抗菌藥物來(lái)治療化膿隱秘桿菌所致的感染,但是隨著抗菌藥物特別是β-內(nèi)酰胺類抗生素的廣泛應(yīng)用,關(guān)于化膿隱秘桿菌分離株耐藥性的報(bào)道也越來(lái)越多。細(xì)菌耐藥性的產(chǎn)生不僅使抗菌藥物的治療效果下降,還可能引起細(xì)菌毒力因子及致病性的改變�；撾[秘桿菌具有多種毒力因子,其中神經(jīng)氨酸酶NanH是其重要毒力因子之一,主要在化膿隱秘桿菌感染動(dòng)物的過(guò)程中起到粘附宿主細(xì)胞的作用。本文通過(guò)檢測(cè)對(duì)β-內(nèi)酰胺類抗生素不同耐藥表型的化膿隱秘桿菌分離株之間NanH的表達(dá)量及對(duì)Hela細(xì)胞的粘附性的差異,分析β-內(nèi)酰胺類抗生素的耐藥對(duì)化膿隱秘桿菌NanH表達(dá)量、細(xì)胞粘附能力的影響,將為深入研究化膿隱秘桿菌的致病機(jī)理奠定基礎(chǔ)。本試驗(yàn)構(gòu)建了化膿隱秘桿菌nanH基因的原核表達(dá)質(zhì)粒pEASY-E1-nanH,在大腸桿菌中獲得可溶性表達(dá)；利用Ni-NTA方法將表達(dá)蛋白純化,以純化后的His-NanH重組蛋白免疫新西蘭大白兔,制備兔抗化膿隱秘桿菌NanH多克隆抗體。所制備的多克隆抗體與天然化膿隱秘桿菌NanH具有良好的反應(yīng)性,抗體效價(jià)達(dá)到1：1280000。利用Western-blot技術(shù)檢測(cè)化膿隱秘桿菌分離株NanH的表達(dá)量,并與標(biāo)準(zhǔn)株NanH表達(dá)量進(jìn)行比對(duì)。結(jié)果表明,對(duì)p-內(nèi)酰胺類抗生素耐藥表型不同的12株化膿隱秘桿菌NanH表達(dá)量存在一定的差異,其中2株分離株NanH表達(dá)量極顯著高于標(biāo)準(zhǔn)株,7株極顯著低于標(biāo)準(zhǔn)株,1株顯著低于標(biāo)準(zhǔn)株,2株差異性不顯著。NanH表達(dá)量最高的分離株是RY04-2,表達(dá)量高達(dá)標(biāo)準(zhǔn)株的4.03倍。分離株TEW01的NanH表達(dá)量最低,僅為標(biāo)準(zhǔn)株的1/12.5。結(jié)合12株化膿隱秘桿菌分離株對(duì)β-內(nèi)酰胺類抗生素耐藥情況分析,結(jié)果顯示,化膿隱秘桿菌分離株NanH表達(dá)量隨著p-內(nèi)酰胺類耐藥性的增加呈增加趨勢(shì)。細(xì)胞粘附試驗(yàn)表明,NanH表達(dá)水平極顯著高于標(biāo)準(zhǔn)株的2株分離株對(duì)Hela細(xì)胞的粘附性也極顯著高于標(biāo)準(zhǔn)株。在表達(dá)量較低的4株分離株中,對(duì)Hela細(xì)胞的粘附性也最低,說(shuō)明化膿隱秘桿菌對(duì)Hela細(xì)胞的粘附性隨著NanH表達(dá)量增加呈增強(qiáng)的趨勢(shì)。并且結(jié)合12株化膿隱秘桿菌分離株對(duì)p-內(nèi)酰胺類抗生素耐藥情況分析,耐3種或4種藥物的分離株,對(duì)Hela細(xì)胞的粘附性顯著高于標(biāo)準(zhǔn)株,且高于大部分對(duì)2種或者2種以下藥物耐藥的分離株。表明化膿隱秘桿菌NanH的表達(dá)量和粘附性隨化膿隱秘桿菌對(duì)β-內(nèi)酰胺類抗生素耐藥性的增強(qiáng)而呈增加的趨勢(shì)。本研究成功制備了兔抗化膿隱秘桿菌NanH多克隆抗體,并檢測(cè)了化膿隱秘桿菌分離株NanH表達(dá)量及對(duì)Hela細(xì)胞的粘附作用,進(jìn)一步揭示了化膿隱秘桿菌NanH的表達(dá)量和粘附性隨化膿隱秘桿菌對(duì)β-內(nèi)酰胺類抗生素耐藥性的增強(qiáng)而呈增加的趨勢(shì)。本研究為深入探討化膿隱秘桿菌的致病機(jī)理,有效防治化膿隱秘桿菌感染性疾病奠定了基礎(chǔ)。
【學(xué)位授予單位】：沈陽(yáng)農(nóng)業(yè)大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2016
【分類號(hào)】：S852.61

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1 耿健;β-內(nèi)酰胺類抗生素耐藥對(duì)化膿隱秘桿菌NanH表達(dá)量及粘附性的影響[D];沈陽(yáng)農(nóng)業(yè)大學(xué);2016年

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本文編號(hào)：1300539