本文關(guān)鍵詞：豬偽狂犬病病毒經(jīng)典毒株與變異毒株P(guān)CR鑒別方法的建立

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【摘要】：豬偽狂犬病是危害世界養(yǎng)豬業(yè)的重要疫病之一。近年來我國免疫豬群出現(xiàn)暴發(fā)、流行,經(jīng)證實其抗原性和毒力發(fā)生了變異。為了有效區(qū)分變異毒株和經(jīng)典毒株,根據(jù)國內(nèi)外偽狂犬病病毒(PRV)變異毒株和經(jīng)典毒株基因序列比對結(jié)果,針對UL44和UL36區(qū)域的基因序列設(shè)計了2對引物,建立兩步法PCR。第一步PCR針對UL44區(qū)域,區(qū)分出經(jīng)典毒株(疫苗株HB98除外)感染與變異毒株感染。第二步PCR針對UL36區(qū)域,區(qū)分出HB98株與偽狂犬病病毒變異毒株。兩步法PCR的敏感度分別達到2~20TCID50和50TCID50病毒量。對豬繁殖與呼吸綜合征病毒、豬圓環(huán)病毒2型、豬瘟病毒、日本腦炎病毒、腦心肌炎病毒和豬流行性腹瀉病毒的核酸應(yīng)用此方法進行擴增,結(jié)果均為陰性。該方法與豬偽狂犬病病毒國家標準PCR檢測方法的符合率達到91%,可用于實驗室快速診斷。
【作者單位】： 南京農(nóng)業(yè)大學動物醫(yī)學院農(nóng)業(yè)部動物疫病診斷與免疫重點開放實驗室;
【基金】：國家生豬產(chǎn)業(yè)技術(shù)體系專項(CARS-36)
【分類號】：S852.651
【正文快照】： 1.4病毒DNA的提取取250 L偽狂犬病病毒液,使用O m ega公司的病毒DNA試劑盒,按說明書操作,提取病毒基因組,用50 L雙蒸水溶解作為DNA模板,-20℃保存?zhèn)溆谩?.5兩步法PCR第一步PCR:PCR反應(yīng)體系:Taq M ix 12.5 L(+0.1 L r T aq),蒸餾水1.5 L,DMSO 2.5 L,10mol/L上游引物1F-C、下游

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