本文關鍵詞：雞LEAP-2抗菌肽基因的克隆及蛋白的表達和純化

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【摘要】：抗菌肽LEAP-2 (liver expressed antimicrobial peptide-2, LEAP-2)是自然界里天然的抗生素,能夠殺滅的細菌種類分布范圍大,還擁有抑制真菌,腫瘤細胞與病毒的功能。但它多數(shù)動物細胞沒有毒性,所以有很好的研究前景和意義。這些年關于家禽的LEAP-2的相關探索才剛開始,本課題主要研究雞的LEAP-2.本實驗應用了網(wǎng)上生物信息軟件對雞LEAP-2基因和蛋白序列進行分析,本研究在體外使用了原核表達體系制備雞抗菌肽LEAP-2�；陔u抗菌肽LEAP-2 mRNA的已知序列(序列號：NM 001001606)來設計一對引物,同時以肉雞肝臟總RNA為模板擴增出了LEAP-2 CDS區(qū)的序列,構建了pGEX-6P-1-LEAP-2的重組質粒,用此轉化大腸桿菌BL21來進行了誘導表達、純化及SDS-PAGE、Western Blot檢測,對純化后的融合蛋白進行了融合頭的切割,對融合蛋白GST-LEAP-2和雞抗菌肽LEAP-2進行體外抗菌活性檢測。結果：成功構建了融合表達載體pGEX-6P-LEAP-2,并成功地表達了雞LEAP-2融合蛋白；融合表達產物對金黃色葡萄球菌和大腸桿菌有一定的抑菌作用,融合蛋白經切割后產生的雞抗菌肽LEAP-2顯示出更強的抗菌活性。結論：生物信息學的分析為進一步探究雞抗菌肽LEAP-2的其他功能和后續(xù)的實驗提供了相關的理論依據(jù)；成功地構建了雞LEAP-2的融合表達體系,目的蛋白大小在8KD左右,體外抗菌活性檢測表現(xiàn)出一定的抗菌活性,為研究在其他動物身上類似的抗菌肽提供了研究基礎。
【學位授予單位】：山西農業(yè)大學
【學位級別】：碩士
【學位授予年份】：2016
【分類號】：S831

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本文編號：1293694