本文關(guān)鍵詞：漆黃素對單增李斯特菌感染妊娠小鼠流產(chǎn)的保護(hù)作用

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【摘要】：單核細(xì)胞增多性李斯特菌(Listeria monocytogenes;L.monocytogenes)簡稱單增李斯特菌,是李斯特菌病的唯一病原菌,該病有著很高的病死率。單增李斯特菌是革蘭氏陽性細(xì)菌,同時也是胞內(nèi)寄生菌,因其可以借助毒力因子的作用,突破吞噬泡膜和細(xì)胞胞膜的束縛作用,在細(xì)胞內(nèi)和細(xì)胞間大量的繁殖和生長,并且可以穿透腸屏障、血胎屏障和血腦屏障,引起較為嚴(yán)重的腸胃炎疾病,母胎的感染以及神經(jīng)性的疾病。根據(jù)現(xiàn)有的資料顯示,能夠穿透血胎屏障并引起疾病的病原微生物只有少數(shù)不多的幾種,而單增李斯特菌就是其中之一。但究其能夠穿透血胎屏障的機制和原理到目前為止仍然沒有較為全面和肯定答案,這同時也為治療該菌所引起的疾病帶來了很大的困難。但越來越多的證據(jù)顯示病原微生物之所以能夠引起胎兒感染并最終導(dǎo)致流產(chǎn)等不良妊娠結(jié)果,是因為能夠在胎盤大量繁殖并且引起胎盤滋養(yǎng)層細(xì)胞的死亡和炎癥反應(yīng),并最終突破胎盤屏障而進(jìn)入胎兒。隨著人們對抗生素大量使用,使得細(xì)菌所致流產(chǎn)等疾病在一定程度上得到了控制,然而細(xì)菌耐藥性的出現(xiàn)再次引起了人們的思考,有沒有更為行之有效的方法能夠不引起耐藥同時達(dá)到治療疾病的效果呢?我們實驗室將目光集中在細(xì)菌的毒力因子上,而單增李斯特菌溶血素(listeriolysin O;LLO)具有裂解吞噬泡,細(xì)菌逃逸至細(xì)胞質(zhì)中增殖的重要作用,是該菌最為重要的毒力因子之一。具有分泌LLO的細(xì)菌能夠逃脫細(xì)胞吞噬泡的作用,在胞內(nèi)和胞間大量的繁殖,而LLO敲除子卻不具有這些功能,最終會被吞噬溶酶體裂解而死亡,使細(xì)菌無法引起胎盤的感染,并且穿透血胎屏障,引起胎兒的感染。我們的實驗小組已經(jīng)充分的證明了漆黃素能夠有效的抑制LLO的寡聚化作用,從而顯著的抑制了單增李斯特菌從細(xì)胞吞噬泡中逃逸的作用,最終達(dá)到了治療單增李斯特菌所引起的小鼠死亡以及肝臟和脾臟的病理變化,起到了很好的保護(hù)作用。那么我們就設(shè)想漆黃素是不是也可以對被單增李斯特菌感染的妊娠小鼠有保護(hù)作用呢?因此我們用野生型的細(xì)菌株EGD和LLO敲除株EGD△hly感染懷孕14.5天的妊娠小鼠,然后每隔8小時注射一次漆黃素,在第42小時后,將小鼠處死采取胎兒、胎盤和子宮的樣本。我們發(fā)現(xiàn),沒有給藥的陽性對照組,小鼠的流產(chǎn)率高達(dá)80%,而藥物組和敲除株陰性對照組基本沒有小鼠流產(chǎn)現(xiàn)象。而倍比稀釋菌落基數(shù)發(fā)現(xiàn)在胎盤、胎兒和子宮藥物組的細(xì)菌數(shù)明顯少于陽性組。ELISA和Western blot實驗同時也說明了漆黃素顯著的減弱了細(xì)菌所引起的細(xì)胞死亡和炎癥反應(yīng)。從胎盤的組織切片可以看出藥物組的胎盤結(jié)構(gòu)趨于完整有序,細(xì)胞滲出減少,血液交換功能基本正常。通過以上的實驗充分說明了漆黃素顯著的抑制了單增李斯特菌所引起的小鼠流產(chǎn)和組織的病理變化。而為了進(jìn)一步探究漆黃素對胎盤的作用,我們采用胎盤滋養(yǎng)層細(xì)胞Be Wo細(xì)胞建立體外感染模型,發(fā)現(xiàn)漆黃素對滋養(yǎng)層細(xì)胞的細(xì)胞死亡抑制作用顯著。藥物處理后的胞內(nèi)細(xì)菌數(shù)也明顯的少于陽性組。綜上所述,我們充分的驗證了漆黃素是通過抑制LLO的寡聚化作用,從而抑制了細(xì)菌胞內(nèi)和胞間大量繁殖,減弱細(xì)菌對胎盤的破壞作用,最終達(dá)到了抑制流產(chǎn)以及胎兒感染的作用。中藥是我華夏民族的瑰寶,是幾千年來炎黃子孫一代又一代人傳承下來的寶貴財富。隨著中國科學(xué)研究的發(fā)展,中藥對各種疑難疾病治療效果被世人所認(rèn)可,得到了更為廣泛的研究和發(fā)展,為人類的健康做出了不和磨滅的貢獻(xiàn)。而中藥成分中黃酮類的化合物更是被證明擁有豐富的生物活性,在抗炎抗氧化等眾多疾病的治療過程中作用顯著。而漆黃素作為黃酮類化合物的重要成員更是被廣泛的應(yīng)用在各種臨床的疾病治療過程中。通過本實驗,我們進(jìn)一步完善了漆黃素對抗單層李斯特菌病的實驗數(shù)據(jù),為該藥的臨床應(yīng)用提供充足的理論依據(jù)。
【學(xué)位授予單位】：吉林大學(xué)
【學(xué)位級別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2016
【分類號】：S852.61

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