本文關(guān)鍵詞：雛鴨原代肝細(xì)胞培養(yǎng)及DHAV-1致肝細(xì)胞損傷的研究

  更多相關(guān)文章： DHAV-1 雛鴨原代肝細(xì)胞 MTP MMP-9 Notch1

【摘要】：肝臟參與多種代謝過程,是人和動(dòng)物的重要的器官。各種致病因子可直接或間接作用于肝臟,導(dǎo)致其結(jié)構(gòu)和或功能異常。這些致病因子主要包括病原微生物、毒素、藥物等。鴨甲型肝炎病毒1型(Duck hepatitis A virus-1,DHAV-1)感染4周齡內(nèi)雛鴨后,造成雛鴨的急性死亡,病變表現(xiàn)為肝臟的出血、壞死、膽管增生、脂肪變性;并可以在雞胚尿囊膜、雞胚成纖維細(xì)胞、鴨胚腎細(xì)胞和肝細(xì)胞等細(xì)胞中增殖,造成細(xì)胞病變。致病因子的性質(zhì)不同,肝損傷的機(jī)制不同。在研究肝損傷相關(guān)機(jī)制時(shí)發(fā)現(xiàn)DHAV-1感染雛鴨后表現(xiàn)為高血脂和低血糖,肝內(nèi)脂代謝異常,脂肪含量增多�；|(zhì)金屬蛋白酶(Matrix metalloproteinase,MMP)9、Notch1基因會(huì)引起病理?xiàng)l件下的肝臟出血、壞死及膽管增生,因此本試驗(yàn)在建立雛鴨DHAV-1感染模型的基礎(chǔ)上,試圖研究DHAV-1對雛鴨肝臟的損傷過程中肝臟中脂肪代謝相關(guān)基因、MMP-9、Notch1發(fā)揮的作用。第一部分:試驗(yàn)成功的培養(yǎng)了雛鴨原代肝細(xì)胞,并建立DHAV-1感染雛鴨原代肝細(xì)胞模型。運(yùn)用QPCR研究雛鴨原代肝細(xì)胞和雛鴨肝臟內(nèi)的甘油二酯酰基轉(zhuǎn)移酶2(Diacylglycerol acyltransferase 2,DGAT2)、甘油三酯脂肪酶(Adipose triglyceride lipase,ATGL)、微粒體甘油三酯轉(zhuǎn)運(yùn)蛋白(Microsomal triglyceride transfer protein,MTP)基因表達(dá)水平。結(jié)果顯示:雛鴨原代肝細(xì)胞感染DHAV-1后DGAT2和ATGL呈升高的趨勢,MTP表達(dá)是下降的,感染組細(xì)胞培養(yǎng)上清中的游離脂肪酸(Free fatty acid,FFA)含量8h最低,然后24h后上升。雛鴨感染組中肝臟DGAT2和ATGL基因轉(zhuǎn)錄水平上均呈升高的趨勢,MTP在12h降低,24h表達(dá)升高,隨后呈降低趨勢。說明雛鴨原代肝細(xì)胞和雛鴨肝臟中的蓄積的脂肪為甘油三酯(Triglyceride,TG),且MTP在TG的蓄積中發(fā)揮重要作用。第二部分:運(yùn)用QPCR研究病毒感染后雛鴨肝臟中核調(diào)節(jié)因子-κB(Nucleus factor-κB,NF-κB)、MMP-9、血小板內(nèi)皮細(xì)胞粘附因子(Platelet endothelial cell adhesion molecule,PECAM)1、Jagged1、Notch1及Notch2的表達(dá),運(yùn)用Western Blot檢測MMP-9蛋白表達(dá)。結(jié)果表明:NF-κB基因轉(zhuǎn)錄水平24h顯著升高,之后呈升高趨勢。MMP-9基因轉(zhuǎn)錄水平在24h開始均呈升高趨勢,其中24h最高;MMP-9蛋白在24h升高。感染組與無感染對照組相比PECAM-1基因表達(dá)在12h到36h變化小,基因表達(dá)較穩(wěn)定,48h表達(dá)降低,72h又恢復(fù)穩(wěn)定。Notch2和Jagged1的表達(dá)均降低,而Notch1的表達(dá)呈上升的趨勢,且在72h達(dá)到最高。說明:NF-κB、MMP-9、PECAM-1在雛鴨病毒性肝炎的肝出血、壞死的過程發(fā)揮重要的生物學(xué)作用;Notch1參與了該病肝膽管增生的過程。
【學(xué)位授予單位】：華中農(nóng)業(yè)大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2016
【分類號(hào)】：S858.32

【參考文獻(xiàn)】

中國期刊全文數(shù)據(jù)庫 前9條

1 甘娜;尹飛;彭鏡;王衛(wèi)東;;MMP-9和細(xì)胞骨架肌動(dòng)蛋白參與缺氧缺血誘導(dǎo)的體外血腦屏障模型通透性增加[J];中國病理生理雜志;2008年10期

2 胡薛英,程國富,周詩其,熊道煥;試驗(yàn)感染鴨病毒性肝炎雛鴨的組織病理學(xué)研究[J];華中農(nóng)業(yè)大學(xué)學(xué)報(bào);2000年01期

3 程國富,胡薛英,周詩其,熊道煥;單克隆抗體PAP法對實(shí)驗(yàn)感染雛鴨體內(nèi)鴨肝炎病毒的定位檢測[J];華中農(nóng)業(yè)大學(xué)學(xué)報(bào);1996年06期

4 羅函祿,范文明,張菊英,劉建平;鴨病毒性肝炎病毒細(xì)胞培養(yǎng)技術(shù)的研究[J];江蘇農(nóng)業(yè)科學(xué);1996年06期

5 黃新民，，陳琨;應(yīng)用鴨胚肝細(xì)胞培養(yǎng)鴨肝炎病毒的研究[J];中國畜禽傳染病;1994年01期

6 徐福南,周芳;鴨病毒性肝炎的組織病理學(xué)研究[J];中國獸醫(yī)科技;1990年02期

7 任祖伊;吳國棟;;鴨病毒性肝炎及其防治技術(shù)的研究[J];浙江畜牧獸醫(yī);1985年01期

8 郭玉璞,潘文石;北京鴨病毒性肝炎血清型的初步鑒定[J];中國獸醫(yī)雜志;1984年11期

9 潘文石,胡壽文,陳永南,邵紹源,唐兆亮;鴨病毒性肝炎的研究(Ⅱ)——鴨肝炎病毒的雞胚化弱毒株(DHV-41)[J];北京大學(xué)學(xué)報(bào)(自然科學(xué)版);1980年04期

中國碩士學(xué)位論文全文數(shù)據(jù)庫 前5條

1 任小交;DHAV-1感染DEF和鴨的細(xì)胞因子IL-2、IL-12-B、IFN-γ基因mRNA表達(dá)水平研究[D];華中農(nóng)業(yè)大學(xué);2014年

2 宋曉娜;鴨源巴氏桿菌的分離鑒定及致病性研究[D];山東農(nóng)業(yè)大學(xué);2012年

3 顏秋萍;車前草和杜仲提取物對肝損傷的保護(hù)作用[D];廣東工業(yè)大學(xué);2012年

4 郭智莉;DHV-Ⅰ對鴨巨噬細(xì)胞TLRs信號(hào)通路的影響[D];西南大學(xué);2012年

5 付培芬;表達(dá)1型鴨肝炎病毒VP1基因重組鴨腸炎病毒的構(gòu)建及其生物學(xué)特性初步研究[D];東北農(nóng)業(yè)大學(xué);2012年

本文編號(hào)：1289285