本文關(guān)鍵詞：添加不同濃度的CLC和LDL對(duì)豬卵母細(xì)胞冷凍保存的影響

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【摘要】：豬卵母細(xì)胞凍存技術(shù)處于不斷優(yōu)化的狀態(tài),由于其結(jié)構(gòu)的獨(dú)特性,凍融過(guò)程中滲透壓等的變化均會(huì)對(duì)卵母細(xì)胞膜及細(xì)胞器造成一定程度的損傷,為了檢測(cè)CLC及LDL對(duì)凍融后豬卵母細(xì)胞線粒體膜電位及ZP泛素化水平的影響,本研究應(yīng)用玻璃化冷凍及緩慢冷凍兩種方法,分別比較添加兩種不同濃度的冷凍載體LDL及CLC后卵母細(xì)胞的線粒體膜電位差異,并分析玻璃化冷凍后MⅡ期卵母細(xì)胞的透明帶泛素化程度。試驗(yàn)主要采用SDS-PAGE以及Western blot方法對(duì)不同處理組的豬卵母細(xì)胞透明帶蛋白樣品進(jìn)行分析,并用線粒體膜電位特異探針JC-1標(biāo)記各處理組線粒體膜電位,采用熒光顯微鏡觀察紅、綠熒光強(qiáng)度和分布情況,為尋找更好的卵母細(xì)胞凍融方法并使之更好地應(yīng)用于生產(chǎn)實(shí)踐提供理論支持。試驗(yàn)得到以下結(jié)果：1.玻璃化冷凍和緩慢冷凍方法凍融GV期卵母細(xì)胞后,LDL及CLC處理組存活率分別74.84%,55.26%以及69.86%,44.53%,玻璃化冷凍豬MⅡ期卵母細(xì)胞解凍后添加不同濃度CLC處理組的細(xì)胞存活率均高于LDL冷凍處理組；添加10%CLC凍融處理組的細(xì)胞存活率顯著高于其他處理組,與新鮮組無(wú)顯著差異(P0.05)2.冷凍保護(hù)劑中添加不同濃度的CLC和LDL(1%,10%,20%)處理組在冷凍解凍后培養(yǎng),MⅡ期卵母細(xì)胞透明帶蛋白免疫印跡結(jié)果分別顯示在63 kDa,82 kDa,110 kDa處以及61 kDa,80 kDa,106 kDa處發(fā)生不同程度的泛素化標(biāo)記,且泛素化條帶灰度值差異顯著,表明豬卵母細(xì)胞體外成熟培養(yǎng)過(guò)程中透明帶蛋白均發(fā)生不同程度的泛素化；3.線粒體膜電位特異探針JC-1標(biāo)記各玻璃化冷凍處理組,10%CLC處理組的△ψm均高于其他冷凍處理組,與新鮮組相比無(wú)顯著差異(P0.05)。
【學(xué)位授予單位】：延邊大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2016
【分類號(hào)】：S828

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