本文關(guān)鍵詞：牦牛HSPA12B基因的克隆及其在體外受精胚胎中的定位表達(dá)

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【摘要】：熱休克蛋白70-12B基因(heat shock 70k D protein-12B,HSPA12B)是HSP70家族中重要一員。HSPA12B可通過抑制胚胎內(nèi)部ROS(活性氧自由基)的產(chǎn)生發(fā)揮細(xì)胞保護效應(yīng),同時也可通過與腫瘤抑制因子P53發(fā)生交互作用而抑制細(xì)胞凋亡。HSPA12B的生物學(xué)功能不僅局限于線粒體上,亞細(xì)胞碎片的免疫熒光檢測發(fā)現(xiàn),HSPA12B也定位于細(xì)胞內(nèi)的其他部位。由于現(xiàn)對HSPA12B蛋白功能的認(rèn)識僅局限于其可促進血管內(nèi)皮細(xì)胞生長方面,對其在胚胎細(xì)胞中的表達(dá)和功能研究甚少,本研究采取RT-PCR法克隆牦牛HSPA12B基因,采用實時熒光定量(RT-q PCR)和免疫熒光方法檢測HSPA12B在早期體外受精胚胎2~4細(xì)胞期、5~8細(xì)胞期、桑椹胚和囊胚中的表達(dá)差異以及蛋白分布,以期從分子水平上掌握HSPA12B的蛋白結(jié)構(gòu)、遺傳特性及其在體外受精胚胎發(fā)育過程中的生物學(xué)作用。研究結(jié)果表明:(1)克隆得到牦牛HSPA12B基因(Gene Bank登錄號:KR258751)。(2)生物學(xué)信息分析結(jié)果顯示,牦牛HSPA12B基因序列具有一個長705 bp的編碼區(qū),可編碼234個氨基酸,其中丙氨酸(Ala)含量最高(10.3%),天冬酰胺(Asn)含量最少(0.9%);同源性分析和系統(tǒng)進化樹顯示,它與黃牛(bos taurus)HSPA12B基因的同源性最高,為99.5%,表明HSPA12B基因在進化中具有高度保守性;編碼產(chǎn)物無信號肽,為非跨膜蛋白,不屬于分泌蛋白,整體表現(xiàn)為親水性。(3)HSPA12B基因在牦牛體外受精2~4細(xì)胞期胚胎、5~8細(xì)胞期胚胎、桑椹胚和囊胚中均有表達(dá);HSPA12B在2~4細(xì)胞期胚胎中的相對表達(dá)量分別是在5~8細(xì)胞期胚胎、桑椹胚和囊胚中相對表達(dá)量的14.8148、4.2699和40.4858倍;HSPA12B在2~4細(xì)胞期胚胎中的相對表達(dá)量,均與在5~8細(xì)胞期胚胎、桑椹胚和囊胚中的相對表達(dá)量差異性極顯著(P0.01)。(4)牦牛早期體外受精胚胎各時期中均有HSPA12B蛋白熒光,在2~4細(xì)胞期胚胎、5~8細(xì)胞期胚胎和桑葚胚中,胞核HSPA12B的表達(dá)量較胞質(zhì)弱;在囊胚中胞核HSPA12B的表達(dá)量較胞質(zhì)強。提示,在體外培養(yǎng)的環(huán)境應(yīng)激條件下,牦牛體外受精胚胎發(fā)育至囊胚時,HSPA12B蛋白的分布可能發(fā)生了移位。(5)HSPA12B在牦牛體外受精胚胎的發(fā)育過程中發(fā)揮重要作用。HSPA12B可能起著抑制細(xì)胞凋亡,延緩細(xì)胞衰老,調(diào)控胚胎早期發(fā)育的作用。本實驗分析了HSPA12B蛋白的基本結(jié)構(gòu)和遺傳特性,并檢測了HSPA12B在不同時期的牦牛體外受精胚胎中的分布和表達(dá),以期從胚胎發(fā)育角度探討熱休克蛋白抑制細(xì)胞凋亡,延緩細(xì)胞衰老,調(diào)控細(xì)胞發(fā)育等作用,文章為進一步研究HSPA12B在體外受精胚胎發(fā)育過程中的細(xì)胞保護作用提供了參考。
【學(xué)位授予單位】：甘肅農(nóng)業(yè)大學(xué)
【學(xué)位級別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2016
【分類號】：S823.85

【參考文獻(xiàn)】

中國期刊全文數(shù)據(jù)庫 前10條

1 潘陽陽;崔燕;樊江峰;李谷月;余四九;;胰島素樣生長因子-1(IGF-1)對牦牛卵丘細(xì)胞熱休克蛋白70(HSP70)表達(dá)的影響及其與細(xì)胞凋亡的關(guān)聯(lián)性分析[J];農(nóng)業(yè)生物技術(shù)學(xué)報;2015年09期

2 潘陽陽;李秦;崔燕;樊江峰;楊琨;何俊峰;余四九;;EGF、EGFR在牦牛卵母細(xì)胞中的表達(dá)及對胚胎發(fā)育能力的作用[J];中國農(nóng)業(yè)科學(xué);2015年12期

3 楊玲;王佳男;邊磊;沈海龍;;外源NO對花楸樹胚胎萌發(fā)和幼苗發(fā)育初期活性氧積累的影響[J];林業(yè)科學(xué);2013年06期

4 張小進;周紅梅;錢進;馬玉潔;程蘊琳;丁正年;劉莉;;PI3K/Akt通路介導(dǎo)HspA12B對小鼠內(nèi)毒素血癥所致心功能不全的保護作用[J];江蘇醫(yī)藥;2013年06期

5 莊利利;胡德寶;蔡麗娟;張也;李鐘淑;許相勛;方南洙;;共培養(yǎng)對小鼠胚胎內(nèi)部活性氧含量影響[J];東北農(nóng)業(yè)大學(xué)學(xué)報;2013年03期

6 莊利利;胡德寶;蔡麗娟;張也;李鐘淑;方南洙;;哺乳動物胚胎的活性氧來源及其抗氧化機制[J];中國畜牧獸醫(yī);2013年03期

7 萬鵬程;石文艷;代蓉;周平;劉守仁;石國慶;;不同培養(yǎng)體系對綿羊體外受精胚胎發(fā)育及細(xì)胞凋亡的影響[J];新疆農(nóng)業(yè)科學(xué);2011年07期

8 字向東;何世明;蔣忠榮;葉子月哈;長壽;尹榮華;張大偉;;牦牛的同期發(fā)情與胚胎體外生產(chǎn)研究[J];西南民族大學(xué)學(xué)報(自然科學(xué)版);2011年03期

9 王立斌;樊江峰;徐庚全;余四九;;不同胚胎移植方法對天祝白牦牛受胎率的影響[J];中獸醫(yī)醫(yī)藥雜志;2010年01期

10 余四九;巨向紅;王立斌;樊江峰;;天祝白牦牛胚胎移植實驗研究[J];中國科學(xué)(C輯:生命科學(xué));2007年02期

中國博士學(xué)位論文全文數(shù)據(jù)庫 前4條

1 張旭;膿毒癥肺損傷時對HSPA12B有調(diào)控作用的miRNAs篩選及其意義[D];第二軍醫(yī)大學(xué);2015年

2 劉r，

本文編號：1242181