發(fā)布時(shí)間：2017-11-30 17:50

  本文關(guān)鍵詞：牦牛BCMO1和BCO2基因的克隆與定量表達(dá)

  更多相關(guān)文章： 牦牛 β-胡蘿卜素 基因克隆 定量表達(dá) 代謝機(jī)制

【摘要】：在適應(yīng)高原嚴(yán)寒環(huán)境方面,牦牛脂肪在能量?jī)?chǔ)存、保護(hù)組織、保持體溫及維持機(jī)體脂溶性維生素平衡等方面具有重要作用。在青綠牧草極缺的季節(jié),牦牛仍然能夠維持體內(nèi)維生素A的平衡,這與牦牛脂肪富集大量類(lèi)胡蘿卜素直接相關(guān)。已有研究表明牦牛的黃色脂肪是由脂肪組織中的β-胡蘿卜素富集所致,那么,牦牛的黃脂以及特殊的代謝途徑也很有可能與β-胡蘿卜素的富集能力有關(guān)。本文選取了參與β-胡蘿卜素代謝的相關(guān)酶基因BCMO1基因和BCO2基因?yàn)檠芯繉?duì)象,利用RT-PCR和RACE技術(shù),克隆得到牦牛的BCMO1基因和BCO2基因全長(zhǎng)cDNA序列,并對(duì)基因結(jié)構(gòu)和蛋白質(zhì)結(jié)構(gòu)進(jìn)行分析;采用實(shí)時(shí)熒光定量法檢測(cè)牦牛營(yíng)養(yǎng)豐盛期和營(yíng)養(yǎng)匱乏期牦牛BCMO1基因和BCO2基因mRNA的表達(dá)差異。結(jié)果顯示:BCMO1基因的序列全長(zhǎng)為1916bp,包括開(kāi)放閱讀框(ORF)1644bp,可編碼576個(gè)氨基酸。BCO2基因的全長(zhǎng)序列為2043bp,開(kāi)放閱讀框(ORF)長(zhǎng)度1662bp,編碼553個(gè)氨基酸�；蚪Y(jié)構(gòu)分析發(fā)現(xiàn),BCMO1基因5'非編碼區(qū)包含的啟動(dòng)子元件TATA盒保證了基因轉(zhuǎn)錄的正確定位;牦牛BCO2基因在其核苷酸序列發(fā)生了無(wú)義突變,使其編碼的氨基酸殘基發(fā)生了改變,對(duì)于這種改變是否導(dǎo)致了牦牛黃脂的形成還有待進(jìn)一步的驗(yàn)證。蛋白質(zhì)結(jié)構(gòu)的分析發(fā)現(xiàn),兩種蛋白都具有RPE65超級(jí)家族的保守結(jié)構(gòu),BCMO1是胞漿蛋白,而B(niǎo)CO2是線(xiàn)粒體蛋白。不同的營(yíng)養(yǎng)時(shí)期牦牛BCMO1和BCO2基因mRNA在肌肉、肝臟、肺臟、腎臟、瘤胃、十二指腸、空腸和回腸8個(gè)被檢組織中均有表達(dá),同一時(shí)期各組織之間的相對(duì)表達(dá)量差異顯著(P0.05)。其中,BCMO1基因mRNA在不同時(shí)期同一組織中的相對(duì)表達(dá)量呈穩(wěn)定趨勢(shì),均在牦牛十二指腸中最高(P0.05),在肺臟中最低(P0.05)。BCO2基因mRNA在營(yíng)養(yǎng)匱乏期的相對(duì)表達(dá)量在牦牛十二指腸中最高(P0.05),在瘤胃中最低(P0.05);在營(yíng)養(yǎng)豐盛期BCO2基因mRNA的表達(dá)量在牦牛肌肉組織中最高(P0.05),在肺臟中最低(P0.05)。牦牛BCMO1基因和BCO2基因的組織表達(dá)特征與類(lèi)胡蘿卜素的攝入水平呈一定的相關(guān)性,可能在牦牛的維生素代謝調(diào)節(jié)和季節(jié)性營(yíng)養(yǎng)適應(yīng)機(jī)制方面發(fā)揮著重要作用。
【學(xué)位授予單位】：青海大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2016
【分類(lèi)號(hào)】：S823.85

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