本文關(guān)鍵詞：LysP45聯(lián)合納米氧化鋅抗耐甲氧西林金黃色葡萄球菌的研究

  更多相關(guān)文章： 噬菌體 噬菌體裂解酶 耐甲氧西林金黃色葡萄球菌 氧化鋅納米材料

【摘要】：金黃色葡萄球菌是重要的人畜共患病病原菌,可引發(fā)多種感染疾病,譬如奶牛乳腺炎和子宮內(nèi)膜炎等,極易造成奶牛繁殖障礙,對奶牛產(chǎn)業(yè)影響巨大。耐甲氧西林金黃色葡萄球菌(MRSA)的出現(xiàn)給這些感染性疾病的臨床治療帶來了極大的困難,對人畜生命健康造成極大威脅,亟待尋求新的治療方法。噬菌體是一種以細(xì)菌為宿主的病毒,它們通過自身產(chǎn)生的裂解酶裂解細(xì)菌的細(xì)胞壁,從而殺死細(xì)菌。因此,噬菌體和裂解酶在治療耐藥性葡萄球菌感染疾病方面表現(xiàn)出巨大的應(yīng)用潛力。但是,裂解酶存在保存周期短,作用時效短等缺點限制了其應(yīng)用。納米氧化鋅對金黃色葡萄球菌也有較好抑菌效果,也可作為良好的酶固定化載體。本研究分離篩選針對耐甲氧西林金黃色葡萄球菌的烈性噬菌體,并對其裂解酶進(jìn)行表達(dá),進(jìn)一步探索裂解酶殺菌活性及其與納米氧化鋅聯(lián)合對抗耐甲氧西林金黃色葡萄球菌的可行性,并分析納米氧化鋅對裂解酶抑菌活性和穩(wěn)定性的影響。試驗一以本實驗室分離保存的金黃色葡萄球菌菌株為宿主菌,進(jìn)行了噬菌體的分離、純化和鑒定,通過宿主范圍研究,進(jìn)一步篩選出一株具有殺菌譜廣、裂解活性強(qiáng)的烈性噬菌體,命名為P45,并對其生物學(xué)特性進(jìn)行了研究,包括最佳感染復(fù)數(shù),一步生長曲線,形態(tài)學(xué)觀察等指標(biāo)。通過透射電子顯微鏡對其進(jìn)行形態(tài)學(xué)觀察,P45屬于肌尾噬菌體科,有長約150 nm、直徑約30 nm的尾巴,頭部呈直徑50±5 nm正六邊形。通過效價分析,確定P45對金黃色葡萄球菌菌株SA45的最佳感染復(fù)數(shù)為0.01。獲取的一步生長曲線中,P45潛伏期僅為20 min,爆發(fā)很快,具備烈性噬菌體的典型特征。試驗二通過克隆裂解酶基因,體外表達(dá)得到高純度裂解酶蛋白(LysP45),摸索分析得到裂解酶的最佳作用條件和殺菌活性,確定殺菌譜。PCR獲得了P45的裂解酶基因,長度為1488bp,并對裂解酶LysP45進(jìn)行了體外表達(dá)和純化。LysP45對耐甲氧西林金黃色葡萄球菌表現(xiàn)出很強(qiáng)的裂解能力,它的最佳作用溫度和pH分別為37°C和7.0。裂解酶LysP45具有更廣的裂解譜,被檢的21株金黃色葡萄球菌均會被其裂解,對溶血葡萄球菌也有較高的裂解活性,但對其他菌株(大腸桿菌,乳酸桿菌和沙門氏菌)沒有殺菌活性。試驗三為了彌補(bǔ)裂解酶時效短、穩(wěn)定性差的不足,分別測定了納米氧化鋅,納米二氧化鈦和納米二氧化硅對裂解酶LysP45活性及穩(wěn)定性的影響。其中,納米氧化鋅能夠顯著地抑制金黃色葡萄球菌SA45的生長,其最低抑菌濃度為0.08 mg/ml。此外,納米氧化鋅還能大大提升裂解酶LysP45的裂解活性:相對于LysP45的單獨(dú)使用,與納米氧化鋅聯(lián)合時產(chǎn)生的抑菌圈直徑增加了3.1mm。在穩(wěn)定性方面,與納米氧化鋅聯(lián)合使用的LysP45在4℃儲存20天后,其對金黃色葡萄球菌SA45的殺菌活性仍能保持在80%以上,而單獨(dú)的Lys P45在4℃儲存10天后,其殺菌活性就下降到50%,并在儲存18天后喪失殺菌活性。綜上所述,納米氧化鋅可以有效提高LysP45的殺菌性能及其穩(wěn)定性。在本研究中,獲得的噬菌體裂解酶LysP4具有廣譜高效的殺菌活性,當(dāng)添加納米氧化鋅與LysP45聯(lián)合時,LysP45表現(xiàn)出更強(qiáng)的裂解活性,且穩(wěn)定性也得到了大幅度的提升,因此納米氧化鋅可以作為裂解酶較好的酶固定化材料。
【學(xué)位授予單位】：西北農(nóng)林科技大學(xué)
【學(xué)位級別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2016
【分類號】：S852.61

【相似文獻(xiàn)】

中國期刊全文數(shù)據(jù)庫 前10條

1 賈漫珂,王俊,鄭思靜,張克立;納米氧化鋅的制備新方法[J];武漢大學(xué)學(xué)報(理學(xué)版);2002年04期

2 石曉波,李春根,汪德先;納米氧化鋅的制備與表征[J];江西師范大學(xué)學(xué)報(自然科學(xué)版);2002年01期

3 楊秀培;納米氧化鋅的制備及其研究進(jìn)展[J];西華師范大學(xué)學(xué)報(自然科學(xué)版);2003年03期

4 ;工業(yè)廢料生產(chǎn)納米氧化鋅技術(shù)[J];蘇南科技開發(fā);2005年07期

5 朱磊;江紅;朱紅;王濱;;納米氧化鋅的表面修飾及其摩擦學(xué)行為研究[J];寧夏大學(xué)學(xué)報(自然科學(xué)版);2007年02期

6 張月甫;李玉國;薛成山;張敬堯;崔傳文;;納米氧化鋅的制備技術(shù)及其應(yīng)用前景[J];山東師范大學(xué)學(xué)報(自然科學(xué)版);2008年02期

7 張瑜;邢錦娟;劉琳;;有機(jī)物表面修飾納米氧化鋅技術(shù)研究進(jìn)展[J];渤海大學(xué)學(xué)報(自然科學(xué)版);2010年02期

8 張起;馬勇;鄧泉;王寅;付宏偉;;納米氧化鋅制備及應(yīng)用研究進(jìn)展[J];中國西部科技;2011年33期

9 呂中;榮凱峰;楊浩;陳嶸;;不同形貌納米氧化鋅的合成及其抗菌活性[J];武漢大學(xué)學(xué)報(理學(xué)版);2013年01期

10 王江;劉海生;;納米氧化鋅懸浮液顯現(xiàn)潮濕表面潛在手印[J];科技資訊;2013年21期

中國重要會議論文全文數(shù)據(jù)庫 前10條

1 徐國躍;;西部地區(qū)氧化鋅納米原料基地建設(shè)及面向21世紀(jì)產(chǎn)業(yè)發(fā)展戰(zhàn)略[A];西部大開發(fā) 科教先行與可持續(xù)發(fā)展——中國科協(xié)2000年學(xué)術(shù)年會文集[C];2000年

2 劉春光;羅青松;;納米氧化鋅的制備技術(shù)與應(yīng)用進(jìn)展[A];2004年中國納米技術(shù)應(yīng)用研討會論文集[C];2004年

3 印萬忠;丁亞卓;;納米氧化鋅的制備技術(shù)現(xiàn)狀和發(fā)展概況[A];中國納米級無機(jī)粉體材料發(fā)展·節(jié)能·環(huán)保高峰論壇論文集[C];2007年

4 李明;李玉芳;;納米氧化鋅的生產(chǎn)和應(yīng)用進(jìn)展[A];中國納米級無機(jī)粉體材料發(fā)展·節(jié)能·環(huán)保高峰論壇論文集[C];2007年

5 覃愛苗;陳海念;唐平;吳建平;;納米氧化鋅-竹炭復(fù)合物的制備及催化性能研究[A];第七屆中國功能材料及其應(yīng)用學(xué)術(shù)會議論文集（第3分冊）[C];2010年

6 覃愛苗;;納米氧化鋅-竹炭復(fù)合物的制備及催化性能研究[A];第七屆中國功能材料及其應(yīng)用學(xué)術(shù)會議論文集（第7分冊）[C];2010年

7 胡澤善;王立光;何滔;葉毅;張波;婁芳;唐德東;董浚修;陳國需;;納米氧化鋅抗磨減磨添加劑的研究[A];'99摩擦學(xué)表面工程學(xué)術(shù)會議論文集[C];1999年

8 駱天榮;;納米氧化鋅的生產(chǎn)與應(yīng)用[A];納米材料和技術(shù)應(yīng)用進(jìn)展——全國第二屆納米材料和技術(shù)應(yīng)用會議論文集（上卷）[C];2001年

9 袁方利;尹春雷;黃淑蘭;李晉林;;納米氧化鋅制備和應(yīng)用研究進(jìn)展[A];納微粉體制備與應(yīng)用進(jìn)展——2002年納微粉體制備與技術(shù)應(yīng)用研討會論文集[C];2002年

10 王利勇;丁士文;張紹巖;;納米氧化鋅的制備及其在高分子材料中的應(yīng)用[A];納米材料和技術(shù)應(yīng)用進(jìn)展——全國第三屆納米材料和技術(shù)應(yīng)用會議論文集（下卷）[C];2003年

中國重要報紙全文數(shù)據(jù)庫 前10條

1 張軍民邋高鵬飛;納米氧化鋅在斷奶子豬飼料中的應(yīng)用[N];中國畜牧獸醫(yī)報;2008年

2 特約通訊員 張建設(shè);稷山年產(chǎn)5萬噸納米氧化鋅工程開工[N];運(yùn)城日報;2010年

3 海峽;納米氧化鋅賦予紡織品新內(nèi)涵[N];中國紡織報;2003年

4 伍思成;活性納米氧化鋅強(qiáng)勢推向陶瓷產(chǎn)業(yè)[N];中國建材報;2004年

5 ;活性納米氧化鋅亮相[N];中國建材報;2004年

6 王靖;活性納米氧化鋅強(qiáng)勢推向陶業(yè)[N];中華建筑報;2004年

7 記者 陶璐璐;河北寧紡集團(tuán)研制成功納米氧化鋅功能整理面料[N];中國紡織報;2011年

8 ;國產(chǎn)活性納米氧化鋅粉體研制成功[N];今日信息報;2004年

9 魏程;活性納米氧化鋅成為陶瓷產(chǎn)業(yè)新原料[N];中國有色金屬報;2004年

10 ;走進(jìn)微觀世界[N];中國機(jī)電日報;2000年

中國博士學(xué)位論文全文數(shù)據(jù)庫 前9條

1 王昕;模板法低維納米氧化鋅的制備與表征[D];浙江大學(xué);2007年

2 吳長樂;納米氧化鋅的形貌控制及性能研究[D];華中科技大學(xué);2008年

3 王之盛;納米氧化鋅的營養(yǎng)生理效應(yīng)研究[D];四川農(nóng)業(yè)大學(xué);2005年

4 王輝虎;納米氧化鋅的控制制備及其光催化性能的研究[D];華中科技大學(xué);2006年

5 嚴(yán)群;稀土氧化物及納米氧化鋅摻雜壓敏材料的制備及機(jī)理研究[D];四川大學(xué);2003年

6 趙士超;H_2O_2溶液反應(yīng)法制備納米氧化鋅顆粒及表征[D];浙江大學(xué);2006年

7 涂敏;亞硝酸鹽對納米氧化鋅和納米二氧化鈦光催化損傷蛋白質(zhì)的促進(jìn)作用研究[D];華中科技大學(xué);2012年

8 張金洋;納米氧化鋅和二氧化鈦的毒性效應(yīng)及致毒機(jī)制探討[D];上海交通大學(xué);2012年

9 郭創(chuàng)奇;聚氨酯基復(fù)合材料的阻尼及水聲吸聲性能研究[D];上海交通大學(xué);2007年

中國碩士學(xué)位論文全文數(shù)據(jù)庫 前10條

1 林璋;納米氧化鋅及其復(fù)合體的防霉和霉菌毒素吸附研究[D];廈門大學(xué);2009年

2 毛志強(qiáng);超臨界（亞臨界水）法連續(xù)制備形貌可控的納米氧化鋅及其光催化性能[D];上海交通大學(xué);2013年

3 陳玉瑩;納米氧化鋅對HEK293細(xì)胞的毒性作用及其作用機(jī)制的研究[D];蘇州大學(xué);2015年

4 楊利姣;鋅渣氧粉低溫濕化學(xué)法制備納米氧化鋅的研究[D];桂林理工大學(xué);2015年

5 王倩倩;有色冶煉行業(yè)低價值物料的高值化利用研究[D];山東大學(xué);2015年

6 李鳳連;濕法回收電爐煙塵中鋅的研究[D];江蘇科技大學(xué);2015年

7 張淑慧;納米氧化鋅對小鼠的毒性研究[D];河南科技大學(xué);2015年

8 晏新程;納米氧化鋅和樂果對小鼠協(xié)同亞急性毒性效應(yīng)的研究[D];中國科學(xué)技術(shù)大學(xué);2013年

9 呂佩佩;棉織物表面納米氧化鋅的可控生長與性能研究[D];西安工程大學(xué);2015年

10 王賀艷;納米氧化鋅的合成、改性及氣敏性能研究[D];太原理工大學(xué);2014年

，

本文編號：1235852