本文關(guān)鍵詞：家兔出血癥病毒VP60基因特異性噬菌體展示肽庫(kù)的構(gòu)建及鑒定

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【摘要】：本研究旨在構(gòu)建家兔出血癥病毒VP60基因特異性噬菌體展示肽庫(kù),并選用已知表位序列的單克隆抗體對(duì)VP60基因特異性肽庫(kù)進(jìn)行鑒定,以確定所構(gòu)建肽庫(kù)的特異性和豐富性。利用DNA酶Ⅰ隨機(jī)消化法構(gòu)建VP60基因噬菌體隨機(jī)肽庫(kù)。采用生物淘選和噬菌體原位雜交技術(shù),選用1B8、1D4、5H3和A3C 4株純化的單克隆抗體對(duì)該肽庫(kù)進(jìn)行抗原表位的鑒定。結(jié)果顯示,所構(gòu)建多肽庫(kù)的滴度約為2.6×1012 PFU/m L,能夠滿足鑒定VP60蛋白的抗原表位的要求,同時(shí)鑒定到4條與VP60蛋白高度同源的序列,分別為N(326)PISQV(331)、D(338)MSFV(342)、K(562)STLVFNL(569)和G(25)TTTDGMDPGVVAA(38),與已知單抗所對(duì)應(yīng)的表位序列高度同源。本研究成功構(gòu)建了家兔出血癥病毒VP60基因特異性隨機(jī)肽庫(kù),選用已知表位序列的單克隆抗體對(duì)構(gòu)建的肽庫(kù)進(jìn)行鑒定,鑒定到的表位與目前已經(jīng)報(bào)道的單抗針對(duì)的表位序列高度同源,表明所構(gòu)建肽庫(kù)的特異性和豐富性良好,為進(jìn)一步篩選和豐富VP60抗原表位奠定基礎(chǔ),還可用于VP60與受體結(jié)合域的鑒定,對(duì)闡述RHDV的感染、致病和免疫保護(hù)機(jī)制具有重要意義。
【作者單位】： 南京農(nóng)業(yè)大學(xué)動(dòng)物醫(yī)學(xué)院;江蘇省農(nóng)業(yè)科學(xué)院獸醫(yī)研究所農(nóng)業(yè)部獸用生物制品工程技術(shù)重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室國(guó)家獸用生物制品工程技術(shù)研究中心;
【基金】：現(xiàn)代農(nóng)業(yè)產(chǎn)業(yè)技術(shù)體系建設(shè)兔體系病毒病預(yù)防與控制崗位項(xiàng)目(CARS-44-C-1) 國(guó)家自然科學(xué)基金項(xiàng)目(31502073) 江蘇省自然科學(xué)基金資助項(xiàng)目(BK20140740)
【分類號(hào)】：S852.65
【正文快照】： 是由家兔出血癥病毒(rabbit hemorrhagic diseasevirus,RHDV)引起的一種家兔的毀滅性傳染病[1]。RHDV基因組由大小約為7.5 kb的單股正鏈RNA組成[2]。RHDV的衣殼蛋白的分子質(zhì)量為60 ku,故稱為VP60,是病毒衣殼的最基本單位[3]。Laurent等[4]對(duì)抗RHDV單克隆抗體的生產(chǎn)及其特性進(jìn)

【相似文獻(xiàn)】

中國(guó)期刊全文數(shù)據(jù)庫(kù) 前7條

1 張旭 ,詹金彪;噬菌體展示肽庫(kù)的篩選方法及其應(yīng)用[J];福建醫(yī)藥雜志;2004年05期

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中國(guó)碩士學(xué)位論文全文數(shù)據(jù)庫(kù) 前1條

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本文編號(hào)：1235451