本文關(guān)鍵詞：家兔出血癥病毒VP60基因特異性噬菌體展示肽庫的構(gòu)建及鑒定

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【摘要】：本研究旨在構(gòu)建家兔出血癥病毒VP60基因特異性噬菌體展示肽庫,并選用已知表位序列的單克隆抗體對VP60基因特異性肽庫進行鑒定,以確定所構(gòu)建肽庫的特異性和豐富性。利用DNA酶Ⅰ隨機消化法構(gòu)建VP60基因噬菌體隨機肽庫。采用生物淘選和噬菌體原位雜交技術(shù),選用1B8、1D4、5H3和A3C 4株純化的單克隆抗體對該肽庫進行抗原表位的鑒定。結(jié)果顯示,所構(gòu)建多肽庫的滴度約為2.6×1012 PFU/m L,能夠滿足鑒定VP60蛋白的抗原表位的要求,同時鑒定到4條與VP60蛋白高度同源的序列,分別為N(326)PISQV(331)、D(338)MSFV(342)、K(562)STLVFNL(569)和G(25)TTTDGMDPGVVAA(38),與已知單抗所對應(yīng)的表位序列高度同源。本研究成功構(gòu)建了家兔出血癥病毒VP60基因特異性隨機肽庫,選用已知表位序列的單克隆抗體對構(gòu)建的肽庫進行鑒定,鑒定到的表位與目前已經(jīng)報道的單抗針對的表位序列高度同源,表明所構(gòu)建肽庫的特異性和豐富性良好,為進一步篩選和豐富VP60抗原表位奠定基礎(chǔ),還可用于VP60與受體結(jié)合域的鑒定,對闡述RHDV的感染、致病和免疫保護機制具有重要意義。
【作者單位】： 南京農(nóng)業(yè)大學(xué)動物醫(yī)學(xué)院;江蘇省農(nóng)業(yè)科學(xué)院獸醫(yī)研究所農(nóng)業(yè)部獸用生物制品工程技術(shù)重點實驗室國家獸用生物制品工程技術(shù)研究中心;
【基金】：現(xiàn)代農(nóng)業(yè)產(chǎn)業(yè)技術(shù)體系建設(shè)兔體系病毒病預(yù)防與控制崗位項目(CARS-44-C-1) 國家自然科學(xué)基金項目(31502073) 江蘇省自然科學(xué)基金資助項目(BK20140740)
【分類號】：S852.65
【正文快照】： 是由家兔出血癥病毒(rabbit hemorrhagic diseasevirus,RHDV)引起的一種家兔的毀滅性傳染病[1]。RHDV基因組由大小約為7.5 kb的單股正鏈RNA組成[2]。RHDV的衣殼蛋白的分子質(zhì)量為60 ku,故稱為VP60,是病毒衣殼的最基本單位[3]。Laurent等[4]對抗RHDV單克隆抗體的生產(chǎn)及其特性進

【相似文獻】

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