本文關(guān)鍵詞：鼠源白細胞介素-4重組乳酸菌對旋毛蟲免疫保護效果研究

  更多相關(guān)文章： 乳酸菌 旋毛蟲 白細胞介素-4 免疫保護

【摘要】：旋毛蟲(Trichinella spiralis)感染能特異性誘導宿主機體產(chǎn)生Th2類細胞因子。白細胞介素-4(Interleukin-4,IL-4)作為重要的Th2細胞因子,在抗寄生蟲感染中扮演著重要角色。宿主感染旋毛蟲后,IL-4會活化相關(guān)效應(yīng)細胞,使其釋放出組織胺、血清素等造成平滑肌收縮增強,從而促進腸道中旋毛蟲的排出。乳酸菌作為一種重要的益生菌,可調(diào)節(jié)胃腸道內(nèi)環(huán)境,提高機體免疫力,也能作為外源蛋白的遞送載體。前期研究發(fā)現(xiàn)BALB/c小鼠進行乳酸菌口服免疫后,可在一定程度上抵抗旋毛蟲的感染及寄生。本研究使用乳酸菌作為基因工程菌表達鼠源白細胞介素-4,并研究了其對旋毛蟲的免疫保護效果,為抗旋毛蟲新型疫苗的開發(fā)奠定了基礎(chǔ)。具體研究內(nèi)容及結(jié)果如下:(1)鼠源白細胞介素-4(mIL-4)重組乳酸菌的制備:將生物公司合成的含有pMD18-T-mIL-4質(zhì)粒的菌株進行質(zhì)粒提取及雙酶切,得到mIL-4片段,將mIL-4片段與帶有表面展示基因的大腸桿菌乳酸菌穿梭表達載體(pSIP409-pgs A)進行連接,構(gòu)建重組質(zhì)粒pSIP409-pgsA-mIL-4,并將其電轉(zhuǎn)入乳酸菌感受態(tài)內(nèi),構(gòu)建鼠源白細胞介素-4重組乳酸菌。通過聚丙烯酰氨凝膠電泳(SDS-PAGE)及蛋白印跡試驗(Western blot)在58kD處發(fā)現(xiàn)條帶,驗證了所構(gòu)建的重組菌成功的表達了mIL-4蛋白且表達的mIL-4蛋白具有反應(yīng)原性。(2)mIL-4重組乳酸菌對旋毛蟲免疫保護效果的研究:將60只雌性BALB/c小鼠隨機分為3組,每20只一組。其中Control組以PBS進行免疫接種,陰性對照組;乳酸菌組(LAB NC8組)以普通的植物乳桿菌NC8(Lactobacillus Plantarum NC8)進行免疫接種,陽性對照組;鼠源白細胞介素-4重組乳酸菌組(重組菌組),以mIL-4重組乳酸菌進行免疫接種,試驗組。具體免疫流程如下:將第一次免疫記為第-21d,在第-21、-20、-19d,連續(xù)免疫三次作為初次免疫,之后第-14、-13d及第-7,-6d進行加強免疫。第0d每只小鼠經(jīng)口灌服500條旋毛蟲,建立旋毛蟲感染模型。于第-1、7、14、21d通過流式細胞術(shù)(FCM)、酶聯(lián)免疫吸附試驗(ELISA)、淋巴細胞增殖試驗對小鼠脾臟(Spleen,SPL)、派伊爾淋巴結(jié)(Pyle Peye,PP)及腸系膜淋巴結(jié)(Mesenteric Lymph Nodes,MLN)中淋巴細胞的生長分化、增殖情況等免疫指標的變化進行檢測。結(jié)果發(fā)現(xiàn),重組乳酸菌組小鼠脾臟、腸系膜淋巴結(jié)和派爾集合淋巴結(jié)中IFN-γ含量較其它兩組的低;T淋巴細胞表面標志CD4+表達水平、IL-4及IL-10的含量較灌服乳酸菌組及對照組的含量明顯增高;重組菌組淋巴細胞增殖能力最強,與乳酸菌組相比差異顯著(P0.05),與對照組相比差異極顯著(P0.01);于第7、14、21d通過ELISA試驗對小鼠血清中IgG1進行檢測,結(jié)果發(fā)現(xiàn):第7d時,重組菌組小鼠血清中IgG1水平極顯著高于乳酸菌組(P0.05)和對照組(P0.001),乳酸菌組與對照組相比差異極顯著(P0.01);第14d時,重組乳酸菌組小鼠血清中IgG1水平與乳酸菌組相比差異極顯著(P0.01),與對照組相比差異極顯著(P0.001);第21天時,重組乳酸菌組小鼠血清中IgG1水平與乳酸菌組相比差異極顯著(P0.01),與對照組相比差異極顯著(P0.001),乳酸菌組與對照組相比差異極顯著(P0.01);于第7、14、21d通過ELISA試驗對小鼠腸內(nèi)容物中SIgA水平進行檢測發(fā)現(xiàn),第7d時,重組乳酸菌組相比乳酸菌組差異顯著(P0.05),與對照組相比差異極顯著(P0.01),乳酸菌組與對照組相比差異極顯著(P0.01);第14d時,重組菌組相比乳酸菌組差異顯著(P0.05),相比對照組差異顯著(P0.05);第21d時,重組菌組與對照組相比差異顯著(P0.05)。第7天做腸道成蟲計數(shù),從數(shù)據(jù)得知,重組菌組成蟲數(shù)在三組之中最少,與乳酸菌組的數(shù)據(jù)比較差異顯著(P0.05),與對照組的數(shù)據(jù)比較差異顯著(P0.05);第28d進行肌肉幼蟲蟲荷檢測,其中重組菌組幼蟲數(shù)最少,與乳酸菌組比較差異顯著(P0.05),與對照組比較差異極顯著(P0.01);乳酸菌組肌幼蟲數(shù)比對照組明顯減少,差異極顯著(P0.01)。以上研究表明鼠源IL-4重組乳酸菌能提高機體腸道粘膜免疫水平,有效促進腸道旋毛蟲成蟲的排出,阻礙幼蟲移行,從而發(fā)揮抗旋毛蟲寄生作用。
【學位授予單位】：吉林農(nóng)業(yè)大學
【學位級別】：碩士
【學位授予年份】：2016
【分類號】：S852.7

【參考文獻】

中國期刊全文數(shù)據(jù)庫 前4條

1 劉學磊;劉玉梅;丁劍冰;馬秀敏;;調(diào)節(jié)性B細胞在感染免疫中的作用研究進展[J];中國病原生物學雜志;2014年04期

2 賈宏信;龔廣予;郭本恒;;益生菌干酪的研究進展[J];食品科學;2013年15期

3 賈中偉;儲德勇;王維;羅慶禮;沈繼龍;;HBV感染對日本血吸蟲病患者肝纖維化的影響及Th1/Th2型細胞因子水平的變化[J];中華檢驗醫(yī)學雜志;2007年10期

4 崔晶;王中全;;我國旋毛蟲病的流行趨勢及防治對策[J];中國寄生蟲學與寄生蟲病雜志;2005年S1期

，

本文編號：1226640