本文關(guān)鍵詞：過氧化氫誘導(dǎo)豬卵巢顆粒細(xì)胞自噬及其對凋亡的影響

  更多相關(guān)文章： 氧化應(yīng)激 自噬 凋亡 豬卵巢顆粒細(xì)胞 -MA

【摘要】：[目的]本試驗(yàn)旨在研究抑制氧化應(yīng)激誘導(dǎo)的自噬對豬卵巢顆粒細(xì)胞凋亡的作用。[方法]采用流式細(xì)胞術(shù)和細(xì)胞計(jì)數(shù)試劑盒(cell counting kit-8,CCK8)檢測不同濃度(0、50、100和150μmol·L~(-1))過氧化氫處理12 h對豬顆粒細(xì)胞的凋亡誘導(dǎo)作用和細(xì)胞活力的影響;Western-blot檢測微管相關(guān)蛋白1輕鏈3(LC3,包括LC3-Ⅰ和LC3-Ⅱ)和自噬相關(guān)蛋白P62/SQSTM1的表達(dá)量變化,轉(zhuǎn)染GFP-LC3質(zhì)粒檢測自噬體的數(shù)量;利用3-甲基腺嘌呤(3-MA)提前4 h抑制自噬后再氧化應(yīng)激12 h,用流式細(xì)胞術(shù)檢測細(xì)胞的凋亡率,CCK8檢測細(xì)胞活力。[結(jié)果]氧化應(yīng)激12 h后,細(xì)胞活力隨過氧化氫濃度提高顯著降低,凋亡率顯著上升。在氧化應(yīng)激前6 h LC3-Ⅱ相對表達(dá)量先增加后減少,P62的相對表達(dá)量先減少再增加;轉(zhuǎn)染GFP-LC3質(zhì)粒后,自噬體數(shù)量極顯著上調(diào),6 h后顯著下降,上述結(jié)果表明在氧化應(yīng)激早期自噬增加,持續(xù)氧化應(yīng)激自噬受到抑制。若提前4 h用3-MA抑制自噬,再用過氧化氫處理12 h,抑制自噬后細(xì)胞凋亡率較單獨(dú)氧化應(yīng)激組顯著下降,細(xì)胞活力也顯著上升。[結(jié)論]氧化應(yīng)激能誘導(dǎo)豬卵巢顆粒細(xì)胞的凋亡和早期自噬,若抑制早期自噬,凋亡率會下降。
【作者單位】： 南京農(nóng)業(yè)大學(xué)動物科技學(xué)院;
【基金】：國家973計(jì)劃項(xiàng)目(2014CB138502)
【分類號】：S828
【正文快照】： 在哺乳動物中,卵泡閉鎖是一種正常的生理過程,研究卵泡閉鎖有助于提高動物的繁殖力�，F(xiàn)在人們普遍認(rèn)為卵巢顆粒細(xì)胞凋亡能導(dǎo)致卵泡閉鎖[1],因此研究顆粒細(xì)胞凋亡具有重要意義�；钚匝�(reactiveoxygen species,ROS)是動物繁殖過程中一種代謝副產(chǎn)物,如果雌性動物卵泡中ROS的生成

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本文編號：1199899