發(fā)布時間：2017-11-17 19:12

  本文關(guān)鍵詞：pSIP409-NP-M1-DCpep乳酸菌制劑抗H9N2亞型禽流感效果的檢測

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【摘要】：禽流感病毒(AIV)在全世界范圍內(nèi)傳播,對家禽和人類健康構(gòu)成嚴重威脅。在許多國家,低致病性禽流感病毒如H9N2不僅能夠引起雛雞輕微呼吸道疾病及產(chǎn)蛋量下降,也是造成大量雛雞養(yǎng)殖嚴重經(jīng)濟損失的重要原因之一。乳酸菌具有安全易培養(yǎng)的特點,是一種多功能型微生態(tài)制劑,作為外源表達載體極具潛力。禽流感病毒的M蛋白(matrix protein,M)與NP蛋白(nucleo-protein,NP)已被證明是有效的候選疫苗抗原,且在不同亞型禽流感病毒之間高度保守。樹突狀細胞誘導(dǎo)肽(DCpep)源于噬菌體的短肽,能顯著增強免疫應(yīng)答。本文旨在研究使用植物乳桿菌NC8遞呈NP-M1-DCpep時,能否增強雛雞模型免疫應(yīng)答抗H9N2亞型禽流感病毒感染。為實現(xiàn)這一目的,以1×109 CFU/200μL劑量給20日齡雛雞灌服乳酸菌制劑NC8-p SIP409-NP-M1-DCpep,初免和加強免疫后,對雛雞感染H9N2亞型禽流感病毒,評價乳酸菌制劑NC8-p SIP409-NP-M1-DCpep抗H9N2亞型禽流感病毒免疫效果。主要研究內(nèi)容及結(jié)果如下:(1)乳酸菌制劑抗H9N2亞型禽流感病毒效果研究雛雞口服給予NC8-p SIP409-NP-M1-DCpep,加強免疫后流式細胞術(shù)檢測雛雞脾臟CD~(4+)和CD~(8+)T細胞的活化情況,MTS比色法檢測雛雞脾臟淋巴細胞特異性增殖轉(zhuǎn)化能力,并采用間接ELISA法檢測加強免疫后雛雞血清、氣管灌洗液中特異性抗體Ig G及SIg A含量。感染H9N2亞型禽流感病毒后,檢測雛雞肺部與喉頭病理損傷,監(jiān)測雛雞體重丟失情況。結(jié)果表明,口服NC8-p SIP409-NP-M1-DCpep能顯著誘導(dǎo)雛雞脾臟強烈的CD~(4+)和CD~(8+)T細胞的活化并增強淋巴細胞增殖轉(zhuǎn)化能力。此外,乳酸菌制劑還能特異性增強雛雞血清中Ig G抗體滴度及氣管灌洗液中SIg A分泌水平。感染H9N2亞型禽流感病毒后,與其它對照組相比,口服乳酸菌制劑NC8-p SIP409-NP-M1-DCpep能顯著降低雛雞肺部及喉頭病理損傷程度并且減少雛雞體重丟失。(2)乳酸菌制劑給藥途徑的篩選雖然,口服乳酸菌制劑在預(yù)防流感病毒感染方面有效果,但由于胃腸道酸性環(huán)境及腸上皮細胞或抗原呈遞細胞的吸收程度等原因,口服給藥及免疫的進展一直相當緩慢。而滴鼻免疫植物乳桿菌由于直接增強呼吸免疫系統(tǒng)在保護抗呼吸道感染方面效果明顯[1]。因此,本研究通過滴鼻與口服兩種途徑免疫乳酸菌制劑,并對雛雞感染H9N2亞型禽流感病毒,進一步對兩種乳酸菌給藥途徑抗H9N2亞型禽流感病毒效果進行比較。乳酸菌制劑給藥途徑篩選結(jié)果表明,滴鼻免疫NC8-p SIP409-NP-M1-DCpep較口服途徑能更顯著增強氣管粘膜SIg A分泌水平,呼吸道粘膜SIg A抗體對抗不同呼吸道病毒感染提供交叉保護作用,與系統(tǒng)性Ig G抗體相比在提高局部免疫應(yīng)答可能具有更高的抗病毒效果。其中,滴鼻免疫NC8-p SIP409-NP-M1-DCpep的雛雞體重丟失率、肺部及氣管病理損傷程度要低于口服免疫NC8-p SIP409-NP-M1-DCpep。滴鼻免疫NC8-p SIP409-NP-M1-DCpep能夠更顯著的誘導(dǎo)雛雞特異性抗H9N2 AIV感染保護性免疫反應(yīng)。
【學位授予單位】：吉林農(nóng)業(yè)大學
【學位級別】：碩士
【學位授予年份】：2016
【分類號】：S855.3

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本文編號：1197063