本文關鍵詞：鑒別豬偽狂犬病病毒的雙重PCR方法的建立及初步應用

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【摘要】：為了檢測豬偽狂犬病病毒(pseudorabies virus,PRV)的感染情況,并進行強弱毒株的鑒別診斷,本研究建立了快速、簡便、靈敏度高、特異性強的鑒別豬PRV的雙重PCR方法。針對PRVgE和gB基因序列,分別設計了2對特異性引物,通過對退火溫度(50~60℃,按照1℃遞增)、引物濃度(0.2~1.4μL,依次增加0.2μL)的優(yōu)化,結果表明,雙重PCR反應的最佳退火溫度為56℃、最適引物添加量為1μL。特異性試驗結果表明,該方法可以擴增出PRV gE(316bp)和gB(432bp)的目的片段,對PCV2、PTV、CSFV、PPV、PRRSV、大腸桿菌的DNA或cDNA均無擴增。敏感性試驗結果表明,PRV gE和gB的最低核酸檢出量分別為4.4×103和3.3×103拷貝/μL,與單一PCR方法的敏感性相近。應用該方法對廣東、廣西地區(qū)臨床送檢的56份組織樣品進行檢測,檢測結果顯示,強毒感染陽性率為53.6%(30/56),陰性率為46.4%(26/56),未發(fā)現有弱毒感染。
【作者單位】： 佛山科學技術學院;中國農業(yè)科學院北京畜牧獸醫(yī)研究所;
【基金】：廣東省自然科學基金項目(S2013010012475)
【分類號】：S852.65
【正文快照】： 偽狂犬病是由偽狂犬病毒(pseudorabies virus,PRV)引起的一種致多種家畜、野生動物以發(fā)熱、奇癢、腦脊髓炎為主要癥狀的急性傳染病,是危害養(yǎng)豬業(yè)健康發(fā)展的重要疾病之一[1-2]。該病是由Aujesz-ky博士首次在匈牙利發(fā)現,目前在世界各地已廣泛流行[3]。該病毒的宿主范圍廣,包括牛

【參考文獻】

中國期刊全文數據庫 前8條

1 林群群;鄭小香;陳鵬強;陳秋勇;曾顯成;胡崇偉;修金生;;豬偽狂犬病病毒NP株gE、gI基因的克隆及序列分析[J];中國畜牧獸醫(yī);2015年09期

2 趙雪麗;閆若潛;吳志明;曹偉偉;王淑娟;謝彩華;馬震原;周兵強;王東方;;鑒別豬偽狂犬病病毒gE基因缺失疫苗和野毒感染的二重PCR診斷方法的建立和應用[J];中國畜牧獸醫(yī);2015年04期

3 羅亞坤;崔尚金;;豬偽狂犬病病毒和豬博卡病毒混合感染的檢測[J];豬業(yè)科學;2014年09期

4 黃藝珠;張淵魁;魏建超;曾亮明;朱海俠;翁燕梅;傅星源;俞建萍;潘海城;謝海明;;豬偽狂犬病毒SD株的分離鑒定及TK基因序列分析[J];畜牧與獸醫(yī);2013年04期

5 董浩;吳博;張建瑩;胡桂學;;豬偽狂犬病病毒疫苗株與野毒株鑒別PCR檢測方法的建立及初步應用[J];中國畜牧獸醫(yī);2011年12期

6 楊雪;朱玲;史小紅;郭萬柱;;基于豬偽狂犬病毒gE基因的PCR法快速診斷豬偽狂犬病的研究[J];黑龍江畜牧獸醫(yī);2010年23期

7 楊毅;李文剛;饒寶;張永濤;呂玉金;;豬偽狂犬病疫苗的研究進展[J];江西農業(yè)學報;2010年03期

8 劉麗娜,何啟蓋,陳煥春,劉正飛,張松林,汪招雄;用多重PCR鑒別豬偽狂犬病野毒與疫苗毒的研究[J];中國獸醫(yī)科技;2005年02期

中國碩士學位論文全文數據庫 前5條

1 朱淑芬;偽狂犬病毒gB基因在畢赤酵母中的表達及初步應用[D];山東農業(yè)大學;2012年

2 文昌清;浙江6個規(guī)�；i場偽狂犬病血清學調查及3種偽狂犬疫苗免疫比較試驗[D];南京農業(yè)大學;2011年

3 王鑫;含GFP報告基因的偽狂犬病病毒Ea株gG基因缺失重組病毒的構建[D];河南農業(yè)大學;2008年

4 邱駿;規(guī)模化豬場豬偽狂犬病防控的研究[D];華中農業(yè)大學;2008年

5 樊淑華;偽狂犬病毒gE基因主要抗原區(qū)的表達及其表達蛋白間接ELISA診斷方法的研究[D];河南農業(yè)大學;2006年

【共引文獻】

中國期刊全文數據庫 前10條

1 練斯南;梁淋;白挨泉;崔尚金;;鑒別豬偽狂犬病病毒的雙重PCR方法的建立及初步應用[J];中國畜牧獸醫(yī);2016年05期

2 羅鋒;;豬偽狂犬病的防治[J];中國畜牧獸醫(yī)文摘;2016年05期

3 羅亞坤;練斯南;藺文成;梁琳;史利軍;趙占中;白挨泉;崔尚金;;兩廣部分地區(qū)仔豬腹瀉死亡的流行病學調查[J];養(yǎng)豬;2016年01期

4 于新友;李天芝;高鵬;王金良;;豬偽狂犬病毒分子生物學檢測方法研究進展[J];豬業(yè)科學;2016年01期

5 韋冠東;馬萍;湯德元;張元鑫;劉霞;黃濤;曾智勇;李謙;李達;;豬偽狂犬病病毒主要基因變異及與gE/gB基因有關的凈化方法研究[J];豬業(yè)科學;2016年01期

6 楊凡;徐志文;李萍;方和俊;郭博;周遠成;;一例豬偽狂犬病病毒的分離鑒定及綜合防治措施[J];豬業(yè)科學;2016年01期

7 楊濤濤;趙墩;劉崇靈;屈泰龍;余興龍;;湖南省4株偽狂犬病病毒的分離鑒定及其免疫與毒力相關基因的序列分析[J];中國畜牧獸醫(yī);2016年01期

8 范克偉;戴愛玲;吳德峰;林煒明;盧馬英;楊小燕;;豬偽狂犬病毒Jiangxi-FZ株的分離鑒定及其重要毒力基因分子特征[J];中國人獸共患病學報;2015年12期

9 高亮;夏春芳;王傳鋒;馬玉輝;;伊寧市豬偽狂犬病的流行病學調查[J];畜禽業(yè);2015年12期

10 羅亞坤;宋傳周;高長彬;梁琳;崔尚金;;豬偽狂犬病病毒和豬博卡病毒混合感染的流行和檢測[J];養(yǎng)豬;2015年06期

中國碩士學位論文全文數據庫 前5條

1 叢鑫;gE/gI/TK三基因缺失偽狂犬病病毒變異株的安全性和免疫原性評價[D];吉林農業(yè)大學;2015年

2 王春花;gI/gE雙基因缺失偽狂犬病病毒變異株的構建和免疫效力評價[D];中國農業(yè)科學院;2014年

3 楊文萍;豬偽狂犬病毒新流行毒株抗原變異與滅活疫苗體液免疫特性研究[D];南京農業(yè)大學;2014年

4 李學普;量子點熒光信號放大及其用于豬偽狂犬病的診斷[D];華中農業(yè)大學;2013年

5 紀喜文;應對化學/生物襲擊的緊急預警系統(tǒng)研究[D];華東理工大學;2011年

【二級參考文獻】

中國期刊全文數據庫 前10條

1 趙鴻遠;彭金美;安同慶;李琳;冷超糧;陳家锃;王倩;常丹;張秋月;蔡雪輝;童光志;田志軍;;豬偽狂犬病病毒變異株的分離鑒定及其gE基因的分子特征[J];中國預防獸醫(yī)學報;2014年07期

2 郭小參;高曉云;陳紅英;杜根成;方劍玉;虞德屏;徐祥臣;張立昌;;豬偽狂犬病毒原陽株gE全基因的克隆與序列分析[J];國外畜牧學(豬與禽);2014年03期

3 楊志遠;韓春華;林健;趙景義;李棟梁;劉月煥;;某規(guī)模化豬場豬偽狂犬病的診斷[J];中國畜牧獸醫(yī);2013年12期

4 史須斌;;豬博卡病毒混合感染的診治病例[J];中國獸醫(yī)雜志;2013年06期

5 翟少倫;陳勝男;魏文康;;豬博卡病毒的研究進展[J];病毒學報;2012年02期

6 尤超;趙大球;梁乘榜;周春華;;PCR引物設計方法綜述[J];現代農業(yè)科技;2011年17期

7 楊雪;朱玲;史小紅;郭萬柱;;基于豬偽狂犬病毒gE基因的PCR法快速診斷豬偽狂犬病的研究[J];黑龍江畜牧獸醫(yī);2010年23期

8 張智明;任德強;戴秀莉;張立恒;潘興廣;;豬偽狂犬病毒H株gE基因的克隆及序列分析[J];中國畜牧獸醫(yī);2010年03期

9 翟少倫;岳城;韋祖樟;冉多良;龍進學;藺濤;鄧宇;孫利廠;黃律;袁世山;;豬博卡病毒PCR檢測方法的建立及其應用[J];中國動物傳染病學報;2010年02期

10 楊毅;李文剛;饒寶;張永濤;呂玉金;;豬偽狂犬病疫苗的研究進展[J];江西農業(yè)學報;2010年03期

中國碩士學位論文全文數據庫 前2條

1 王大偉;抗偽狂犬病毒單克隆抗體的制備及gB基因編碼蛋白抗原表位的表達[D];河南科技大學;2011年

2 李t，

本文編號：1190788