本文關(guān)鍵詞：鑒別豬偽狂犬病病毒的雙重PCR方法的建立及初步應(yīng)用

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【摘要】：為了檢測豬偽狂犬病病毒(pseudorabies virus,PRV)的感染情況,并進(jìn)行強(qiáng)弱毒株的鑒別診斷,本研究建立了快速、簡便、靈敏度高、特異性強(qiáng)的鑒別豬PRV的雙重PCR方法。針對PRVgE和gB基因序列,分別設(shè)計了2對特異性引物,通過對退火溫度(50~60℃,按照1℃遞增)、引物濃度(0.2~1.4μL,依次增加0.2μL)的優(yōu)化,結(jié)果表明,雙重PCR反應(yīng)的最佳退火溫度為56℃、最適引物添加量為1μL。特異性試驗(yàn)結(jié)果表明,該方法可以擴(kuò)增出PRV gE(316bp)和gB(432bp)的目的片段,對PCV2、PTV、CSFV、PPV、PRRSV、大腸桿菌的DNA或cDNA均無擴(kuò)增。敏感性試驗(yàn)結(jié)果表明,PRV gE和gB的最低核酸檢出量分別為4.4×103和3.3×103拷貝/μL,與單一PCR方法的敏感性相近。應(yīng)用該方法對廣東、廣西地區(qū)臨床送檢的56份組織樣品進(jìn)行檢測,檢測結(jié)果顯示,強(qiáng)毒感染陽性率為53.6%(30/56),陰性率為46.4%(26/56),未發(fā)現(xiàn)有弱毒感染。
【作者單位】： 佛山科學(xué)技術(shù)學(xué)院;中國農(nóng)業(yè)科學(xué)院北京畜牧獸醫(yī)研究所;
【基金】：廣東省自然科學(xué)基金項目(S2013010012475)
【分類號】：S852.65
【正文快照】： 偽狂犬病是由偽狂犬病毒(pseudorabies virus,PRV)引起的一種致多種家畜、野生動物以發(fā)熱、奇癢、腦脊髓炎為主要癥狀的急性傳染病,是危害養(yǎng)豬業(yè)健康發(fā)展的重要疾病之一[1-2]。該病是由Aujesz-ky博士首次在匈牙利發(fā)現(xiàn),目前在世界各地已廣泛流行[3]。該病毒的宿主范圍廣,包括牛

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2 李t，

本文編號：1190788