本文關(guān)鍵詞：BHV-1感染對(duì)牛胚氣管細(xì)胞TLR2和TLR9表達(dá)的影響

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【摘要】：BHV-1是牛傳染性鼻氣管炎(Infectious Bovine Rhinotracheitis, IBR)的病原,主要侵害呼吸系統(tǒng)、生殖系統(tǒng)、神經(jīng)系統(tǒng)、眼結(jié)膜和胎兒,該病毒的免疫逃避和潛伏感染以及引起的持續(xù)性感染是控制IBR的主要障礙。TLR是近年來(lái)免疫反應(yīng)研究中備受重視的跨膜信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)蛋白,能夠激活天然免疫并啟動(dòng)獲得性免疫系統(tǒng)。TLR2和TLR9可介導(dǎo)宿主對(duì)皰疹病毒感染的天然免疫反應(yīng),本文將牛胚氣管細(xì)胞(Bovine Embryo Tracheal Cells, EBTr)作為機(jī)體組織的非免疫細(xì)胞模型,從基因和蛋白水平探討B(tài)HV-1感染對(duì)TLR2和TLR9表達(dá)的影響,并獲得了以下結(jié)果。(1) RT-PCR檢測(cè)EBTr細(xì)胞TLR1～10mRNA的表達(dá)模式,結(jié)果顯示,EBTr細(xì)胞表達(dá)TLR1、2、3、4、6、7、9、10,而TLR5和TLR8的mRNA未被檢測(cè)到。(2)建立了TaqMan熒光定量PCR方法,并檢測(cè)BHV-1感染EBTr細(xì)胞6、12、24、48、72、96、120和144h后病毒的增殖規(guī)律。結(jié)果顯示,BHV-1感染EBTr細(xì)胞后可產(chǎn)生明顯的細(xì)胞病變,感染144h內(nèi)病毒一直緩慢增殖,而且細(xì)胞形態(tài)變化與病毒生長(zhǎng)曲線的走勢(shì)吻合。(3)將EBTr細(xì)胞分為BHV-1攻毒組和對(duì)照組,分別在培養(yǎng)第6、12、24及48h時(shí)用優(yōu)化建立的SYBR Green熒光定量PCR方法檢測(cè)TLR2和TLR9mRNA表達(dá)量的變化,Western blot技術(shù)檢測(cè)TLR2蛋白表達(dá)量的變化,實(shí)驗(yàn)內(nèi)參為β-actin。結(jié)果顯示,BHV-1在感染EBTr細(xì)胞的48h內(nèi),攻毒組TLR2mRNA和蛋白的相對(duì)表達(dá)量均高于對(duì)照組,且感染48h時(shí)與對(duì)照組的差異極顯著(P0.01),BHV-1感染能顯著上調(diào)TLR2mRNA和蛋白的表達(dá)。攻毒組TLR9mRNA的相對(duì)表達(dá)量在感染EBTr細(xì)胞的48h內(nèi)低于對(duì)照組,且24h和48h的差異極顯著(P0.01),BHV-1感染下調(diào)TLR9mRNA的表達(dá)。本試驗(yàn)結(jié)果表明,BHV-1感染EBTr細(xì)胞后可導(dǎo)致其表達(dá)TLR2和TLR9發(fā)生改變,為下一步研究TLR2和TLR9介導(dǎo)BHV-1在EBTr細(xì)胞中的的免疫機(jī)制奠定了基礎(chǔ)。
【學(xué)位授予單位】：內(nèi)蒙古農(nóng)業(yè)大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2016
【分類號(hào)】：S858.23

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本文編號(hào)：1189803