本文關(guān)鍵詞：利用RNA干擾技術(shù)研究RORα對(duì)褪黑激素促進(jìn)絨毛生長(zhǎng)相關(guān)基因表達(dá)的影響

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【摘要】：本實(shí)驗(yàn)利用RNAi技術(shù)阻斷在褪黑激素作用下的內(nèi)蒙古絨山羊皮膚成纖維細(xì)胞中RORa基因的表達(dá),應(yīng)用熒光定量PCR技術(shù)檢測(cè)干擾前后的RORa基因,以及與毛囊發(fā)育相關(guān)基因的表達(dá)情況,探討RORa在褪黑激素促進(jìn)絨毛生長(zhǎng)中的作用,為進(jìn)一步探索褪黑激素促進(jìn)絨毛生長(zhǎng)奠定了重要的理論基礎(chǔ)。主要研究結(jié)果如下：1.本試驗(yàn)采用Ⅳ型膠原酶和胰蛋白酶聯(lián)合消化,避免了由于長(zhǎng)時(shí)間的胰蛋白酶處理而造成的細(xì)胞損傷,能夠更好更加效率的分離培養(yǎng)成纖維細(xì)胞。2.利用shRNA轉(zhuǎn)染絨山羊皮膚成纖維細(xì)胞48h后,經(jīng)熒光定量PCR技術(shù)檢測(cè)RORa基因的表達(dá)量,結(jié)果顯示：轉(zhuǎn)染后RORa mRNA表達(dá)量顯著受到抑制(P0.05),陰性對(duì)照組中的表達(dá)量幾乎不受影響(P0.05),說明該shRNA對(duì)RORa存在特異且高效的沉默作用。為進(jìn)一步探索RORa基因在褪黑激素促進(jìn)絨毛生長(zhǎng)中的重要作用奠定基礎(chǔ),提供了新的研究方向。3.在干擾抑制RORa基因的基礎(chǔ)上分析β-catenin、SFRP1和TCHHL1基因的表達(dá)變化,添加褪黑激素后,β-catenin基因表達(dá)量顯著增加(P0.05),SFRP1基因表達(dá)量幾乎不受影響(P0.05),TCHHL1基因表達(dá)量顯著降低(P0.05)。轉(zhuǎn)染后,三個(gè)基因的表達(dá)均呈現(xiàn)不同程度變化。提示了褪黑激素在絨毛生長(zhǎng)中可能通過與RORa結(jié)合進(jìn)而影響β-catenin、SFRP1和TCHHL1基因的表達(dá),促進(jìn)絨毛生長(zhǎng)。
【學(xué)位授予單位】：內(nèi)蒙古農(nóng)業(yè)大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2016
【分類號(hào)】：S827

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本文編號(hào)：1187499