本文關(guān)鍵詞：無標(biāo)記TALEN技術(shù)編輯FGF5基因絨山羊細(xì)胞株的建立

  更多相關(guān)文章： 無篩選標(biāo)記基因 TALEN FGF5 絨山羊

【摘要】：成纖維細(xì)胞生長因子5(FGF5)是FGFs基因家族因子中的一員,是重要的調(diào)節(jié)細(xì)胞生長的生長因子,FGF5在毛發(fā)生長周期中具有重要的調(diào)控作用,FGF5基因突變可以導(dǎo)致毛發(fā)生長周期中生長期的延長,從而使毛發(fā)的長度增加。本研究的目的是建立一種安全有效的方法,設(shè)計無標(biāo)記TALEN技術(shù)FGF5基因編輯載體,將無標(biāo)記TALEN技術(shù)FGF5基因編輯載體用電轉(zhuǎn)法轉(zhuǎn)染到絨山羊胎兒成纖維細(xì)胞中,篩選陽性細(xì)胞并擴繁,為體細(xì)胞核移植提供無篩選標(biāo)記的供體細(xì)胞,為創(chuàng)制具有高產(chǎn)絨性狀的新型絨山羊種質(zhì)材料奠定基礎(chǔ)。根據(jù)絨山羊的FGF5第一外顯子基因序列,設(shè)計并構(gòu)建了3對無標(biāo)記TALEN載體pCS7-FGF5-eT1、pCS7-FGF5-eT2、pCS7-FGF5-eT3,經(jīng)測序、SSA活性檢測以及T7E1酶切鑒定,表明載體構(gòu)建正確,并且載體pCS7-FGF5-eT2具有活性,可用于后續(xù)電轉(zhuǎn)染實驗。用電轉(zhuǎn)染法將具有活性的無標(biāo)記TALEN載體pCS7-FGF5-eT2轉(zhuǎn)染到絨山羊胎兒成纖維細(xì)胞中,用單細(xì)胞培養(yǎng)法篩選陽性細(xì)胞并擴繁,經(jīng)過測序鑒定,2-29號單細(xì)胞株在靶標(biāo)區(qū)域插入單堿基,從而造成了靶標(biāo)區(qū)域下游基因的移碼突變,進而將導(dǎo)致FGF5基因不能編碼正常的蛋白,建立了無標(biāo)記FGF5基因的轉(zhuǎn)基因絨山羊細(xì)胞株,為生產(chǎn)無篩選標(biāo)記的轉(zhuǎn)基因內(nèi)蒙古白絨山羊奠定了基礎(chǔ)。
【學(xué)位授予單位】：內(nèi)蒙古農(nóng)業(yè)大學(xué)
【學(xué)位級別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2016
【分類號】：S827

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本文編號：1176958